[发明专利]一种通过建立miRNAs表达水平预测三阴性乳腺癌复发转移时间及预后的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种通过建立miRNAs表达水平预测三阴性乳腺癌复发转移时间及预后的方法。

背景技术

三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer，TNBC)是一种恶性程度高、侵袭性强的乳腺癌类型，缺少内分泌治疗和靶向治疗的靶点，故化疗是手术之外的主要药物治疗方法。TNBC术后复发率和转移率相对较高，易耐药，预后差，这是TNBC治疗目前面临的重点和难点。因此，准确预测TNBC复发和转移时间并合理采取化疗等针对性措施，对TNBC患者预后的改善及医疗资源的高效配置有积极的价值。

MicroRNA(简称miRNA)是一类含有18～22个核苷酸的内源性的非编码的RNA分子，它广泛存在于真核生物中，是一类重要的基因表达调控因子，在细胞的增殖、发育、分化及凋亡中发挥着重要作用。miRNA可以通过和mRNA的3'-UTR区特异性结合抑制靶基因的转录或诱导mRNA的降解，在生物体内发挥癌基因或抑癌基因的作用。根据生物信息学分析，人类基因的92％受miRNA的调节，现有证据表明miRNA的异常调节参与乳腺癌的发生发展。但是，目前尚没有利用miRNAs准确预测TNBC复发和转移时间及预后的报道。

发明内容

本发明的目的是，提供一种通过建立miRNAs表达水平预测三阴性乳腺癌复发转移时间及预后的方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：

一种通过建立miRNAs表达水平预测三阴性乳腺癌复发转移时间及预后的方法，包括以下步骤：

步骤1、样本的收集：

采集三阴乳腺癌病人及部分乳腺纤维瘤患者瘤旁正常乳腺组织，取临床相关乳腺标本大小；形成处理组细胞和对照组细胞；

步骤2、RNA提取和定量PCR；

步骤3、RNA样本poly A加尾：

对RNA样品进行PolyA加尾，反应体系为：Total RNA 2|_ig，10xPolyA PolymeraseBuffer 210x ATP Solution 2，配好后于37℃反应15min；

步骤4、反转录和定量PCR：

用Rever-Tra-Ace-a-Transcriptase进行反转录，然后用SYBRP^＠remix Ex Taq^＠n进行QRT-PCR，miRNA的反转录釆用通用引物，U6snRNA作为内参基因，先检测引物的扩增效率和溶解曲线，引物的扩增效率在1.95-2.05之间，溶解曲线为单峰，无引物二聚体，然后再进行后续的步骤；

步骤5、数据分析：

数据分析方法采用方差分析和Student T检验分析，P<0.05认为是有显著差异，P<0.0l认为有极显著差异。

在上述技术方案中，定量PCR仪器型号为LightCycler 480Real-Time PCR system。

在上述技术方案中，处理组细胞相比于对照组细胞的miRNA或mRNA的改变倍数用2-△△Ct方法计算。

在上述技术方案中，步骤1～4重复进行3次。

本发明的有益效果是：

本发明提供的一种通过建立miRNAs表达水平预测三阴性乳腺癌复发转移时间及预后的方法，该方法揭示了miR-4262、miR-670-3p、miR-152-3p、miR-216a-5p表达水平和3年、5年无病生存时间(disease free survival，DFS)及总生存时间(overall survival，OS)均存在显著相关，提示miR-4262、miR-670-3p、miR-152-3p、miR-216a-5p高表达的TNBC患者复发转移时间，多于术后2-3年以内，预后较差。对这部分患者提前采取针对性治疗具有降低复发转移风险及改善预后的作用。

本发明提供的一种通过建立miRNAs表达水平预测三阴性乳腺癌复发转移时间及预后的方法，该方法将miR-4262、miR-670-3p、miR-152-3p、miR-216a-5p作为分子标记物组合，对TNBC患者转移和复发进行预警，为TNBC的合理治疗提供了新依据，从而可以对TNBC患者采取针对性干预措施，提高了治疗效果，改善了患者的预后。因此，miR-4262、miR-670-3p、miR-152-3p、miR-216a-5p作为分子标记物具有预警TNBC患者复发转移并预测其预后的应用价值。

具体实施方式