[发明专利]一种通过建立miRNAs表达水平预测三阴性乳腺癌复发转移时间及预后的方法

权利要求书

1.一种通过建立miRNAs表达水平预测三阴性乳腺癌复发转移时间及预后的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、样本的收集：

采集三阴乳腺癌病人及部分乳腺纤维瘤患者瘤旁正常乳腺组织，取临床相关乳腺标本大小；形成处理组细胞和对照组细胞；

步骤2、RNA提取和定量PCR；

步骤3、RNA样本poly A加尾：

对RNA样品进行PolyA加尾，反应体系为：Total RNA 2|_ig，10xPolyA PolymeraseBuffer 210x ATP Solution 2，配好后于37℃反应15min；

步骤4、反转录和定量PCR：

用Rever-Tra-Ace-a-Transcriptase进行反转录，然后用SYBRP^＠remix Ex Taq^＠n进行QRT-PCR，miRNA的反转录釆用通用引物，U6snRNA作为内参基因，先检测引物的扩增效率和溶解曲线，引物的扩增效率在1.95-2.05之间，溶解曲线为单峰，无引物二聚体，然后再进行后续的步骤；

步骤5、数据分析：

数据分析方法采用方差分析和Student T检验分析，P<0.05认为是有显著差异，P<0.0l认为有极显著差异。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，定量PCR仪器型号为LightCycler 480Real-Time PCR system。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，处理组细胞相比于对照组细胞的miRNA或mRNA的改变倍数用2-△△Ct方法计算。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1～4重复进行3次。