[发明专利]一种检测萝卜Ogura-CMS育性恢复基因的高通量分子标记及应用

权利要求书

1.用于检测萝卜Ogura-CMS育性恢复基因Rfo的KASP标记专用引物，其特征在于包括：

(1)引物1：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCAGCTGCAGAAACATTTTATCAGAATG-3’；其中GAAGGTGACCAAGTTCATGCT为标签序列A；所述引物1为序列表中序列1所示的单链DNA；

(2)引物2：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCAGCTGCAGAAACATTTTATCAGAATA-3’；其中GAAGGTCGGAGTCAACGGATT为标签序列B；所述引物2为序列表中序列2所示的单链DNA；

(3)引物3：5’-GAAAGGAAACAGATTCGATGTGATATATACA-3’；所述引物3为序列表中序列3所示的单链DNA。

2.用于检测萝卜Ogura-CMS育性恢复基因Rfo的试剂盒，其特征在于包括：

(1)所述试剂盒中含有权利要求1中所述的KASP引物；

(2)所述试剂盒中含有荧光探针A、荧光探针B、淬灭探针A和淬灭探针B；所述荧光探针A的核苷酸序列与权利要求1所述标签序列A的核苷酸序列一致，5’末端连接荧光基团FAM；所述淬灭探针A的核苷酸序列与权利要求1所述标签序列A的核苷酸序列反向互补，3’末端连接淬灭基团BHQ；所述荧光探针B的核苷酸序列与所述标签序列B的核苷酸序列一致，5’末端连接荧光基团HEX；所述淬灭探针B的核苷酸序列与所述标签序列B的核苷酸序列反向互补，3’末端连接淬灭基团BHQ。

3.权利要求1中所述的KASP引物或权利要求2所述的试剂盒用于检测萝卜Ogura-CMS育性恢复基因Rfo的基因型和培育萝卜不育系的方法。

4.权利要求3中所述的检测萝卜Ogura-CMS育性恢复基因Rfo的基因型的方法，其特征在于包括如下步骤：以萝卜基因组DNA为模板，采用权利要求2所述试剂盒进行PCR扩增，将所得扩增产物进行荧光信号扫描，采用Kraken软件对扫描数据进行分析，根据分析结果判定待测萝卜Ogura-CMS育性恢复基因Rfo的基因型：若待测萝卜的扩增产物的荧光信号数据经Kraken软件分析在所得分型聚类图中呈现红色，则所述待测萝卜的Rfo基因的基因型为RfRf；若所述待测萝卜的扩增产物的荧光信号数据经Kraken软件分析在所得分型聚类图中呈现蓝色，则所述待测萝卜的Rfo基因的基因型为rfrf；若所述待测萝卜的扩增产物的荧光信号数据经Kraken软件分析在所得分型聚类图中呈现绿色，则所述待测萝卜的Rfo基因的基因型为Rfrf。

5.权利要求3中所述的培育萝卜不育系的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)利用已公开的萝卜Ogura-CMS线粒体不育基因orf138筛选获得不含有orf138基因的萝卜单株；

(2)利用权利要求4所述的检测方法对(1)中筛选获得的单株进行育性恢复基因Rfo的基因型鉴定，获得Rfo基因的基因型为rfrf的单株；

(3)以萝卜Ogura-CMS不育株为母本，上述(2)筛选获得的单株为父本和轮回亲本，进行连续6-7代回交和轮回亲本单株自交，即可获得遗传背景一致、稳定遗传的萝卜不育系和相应的保持系。