[发明专利]从红牛膝中分离纯化皂苷类成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物化学，具体涉及从红牛膝中分离纯化皂苷类成分的方法。

背景技术

红牛膝，为四川凉山彝族自治州、云南楚雄彝族自治州、贵州等彝族地区的彝医临床常用药材，在凉山彝族自治州，称为勒死补你或乃死补你为苋科植物头花杯苋Cyathula Capitata(Wall.)Moq.的根，用于治疗跌打损伤、风湿、类风湿等疾病。

国内外对牛膝类药材的研究主要集中在中医临床上常用的牛膝Achyranthes bidentata Blume与川牛膝Cyathula officinalis Kuan；红牛膝的相关研究较少。红牛膝作为四川凉山彝族自治州、云南楚雄彝族自治州、贵川等彝族地区的彝医临床常用药材，目前对红牛膝成分的研究报道较少。

发明内容

本发明提供了从红牛膝中分离纯化皂苷类成分的方法，所述皂苷类成分如下之一所示：

化合物Ⅲ：R₁＝H，化合物Ⅳ：化合物Ⅴ：

该方法包括如下操作：

(1)取红牛膝，以含水或不含水的醇类溶剂提取，提取液浓缩至无醇味，以正丁醇萃取，取正丁醇部位上硅胶柱，依次用如下配比的三氯甲烷:甲醇:水下相梯度洗脱：15:1:0.2、10:1:0.2、8:1:0.2、6:1:0.2、3:1:0.2、2:1:0.2，薄层追踪，合并相同组分，并对合并的相同组份按顺序编号；

(2)分别取第3、4或5组份，上硅胶柱，依次用如下配比的三氯甲烷:甲醇:水下相梯度洗脱：(6～4):1:0.2、3:1:0.2、2:1:0.2，薄层追踪，合并相同组分，上葡聚糖凝胶柱，甲醇：水(30～50):(70～50)洗脱，分别得化合物Ⅲ、IV或V。

进一步地，步骤(2)中，取洗脱得到的第3组份上硅胶柱，依次用如下配比的三氯甲烷:甲醇:水下相梯度洗脱：6:1:0.2、3:1:0.2、2:1:0.2，薄层追踪，合并相同组分，上葡聚糖凝胶柱，甲醇：水50:50洗脱，得化合物Ⅲ。

进一步地，步骤(2)中，取洗脱得到的第4组份上硅胶柱，依次用如下配比的三氯甲烷:甲醇:水下相梯度洗脱：6:1:0.2、3:1:0.2、2:1:0.2，薄层追踪，合并相同组分，上葡聚糖凝胶柱，甲醇：水50:50洗脱，得化合物Ⅳ。

进一步地，步骤(2)中，取洗脱得到的第5组份上硅胶柱，依次用如下配比的三氯甲烷:甲醇:水下相梯度洗脱：4:1:0.2、3:1:0.2、2:1:0.2，薄层追踪，合并相同组分，上葡聚糖凝胶柱，甲醇：水30:70洗脱，得化合物。

其中，所述醇类溶剂选自甲醇或乙醇；所述含水醇类溶剂中醇类溶剂的浓度为60～85％v/v。

本发明一个具体实施方式中，所述含水醇类溶剂中醇类溶剂的浓度为70～80％v/v。

其中，采用薄层追踪时，以硫酸乙醇溶液为显色剂。

本发明中，正丁醇萃取前，可以参照系统溶剂法进行逐级萃取，如本发明一个具体实施方式中，依次使用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯进行萃取。

上述方法可以从红牛膝中分离得到齐墩果酸皂苷类成分，可以保证较高的纯度，为红牛膝的深入研究鉴定了一定的物质基础。

发明人在对红牛膝的化学成分进行分离纯化过程中，发现了多种齐墩果酸类皂苷成分，其中就包括3-O-[α-L-吡喃鼠李糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸]-齐墩果酸、3-O-(β-D-吡喃葡萄糖醛酸)-齐墩果酸28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、3-O-[α-L-吡喃鼠李糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸]-齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。经药理研究及临床验证表明，齐墩果酸皂苷类成分具有保肝护肝、调节免疫、抗炎、抑菌、抗病毒、延缓衰老、防治心血管疾病等作用^[1-4]，在药品及保健品的开发中具有广阔的应用前景。

另外，目前还没有见使用具体化学成分对红牛膝的质量进行控制的报道，本发明分离的齐墩果酸类皂苷在一定程度上与红牛膝的药效相关，或可以作为对红牛膝质量检测的物质基础。

其中，经过UPLC检测发现，3-O-[α-L-吡喃鼠李糖(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖醛酸]-齐墩果酸-28-O-(β-D-吡喃葡萄糖)在各批次药材中的含量波动较小。以此成分来作为检测红牛膝的指标成分，不仅可以从一定程度上反应药效，还可以使得检测结果更加稳定，重现性好。