[发明专利]一种检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性的引物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种TaqMan-MGB探针法同时检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性的方法和应用。

背景技术

酒精代谢相关基因是分子进化和群体遗传学研究的热点之一。酒精化学名乙醇，饮酒后乙醇经肠胃吸收进入血液。进入体内的乙醇90％--95％通过肝脏进行代谢，其余随尿液、汗液和呼吸排出。乙醇在肝脏内主要需经过两步代谢反应：从乙醇氧化为乙醛；从乙醛再氧化为乙酸。这两步代谢反应都是在酶的催化下进行的，前者的酶叫乙醇脱氢酶(ADH)，后者的酶叫乙醛脱氢酶(ALDH)。基因科学家的研究表明，乙醇脱氢酶主要由ADH1B基因编码，乙醛脱氢酶主要由ALDH2基因编码。这两种酶的突变可影响酒精代谢进而引起乙醛等有害物质的堆积，影响身体健康。而乙醛毒性很强，是第一类致癌原。慢代谢的人饮酒后体内乙醛会迅速累积，进而引发脸红、心跳加速、恶心呕吐和头痛等不适反应。研究表明，乙醛慢代谢的人若长期饮酒，消化道癌症如食道癌和肝癌的发病率会显著上升。因此通过检测ADH1B、ALDH2两种基因，能够帮助大家更具体地了解自己的酒精代谢能力，更具体地了解饮酒的健康风险，提前做好预防；同时基因检测还能够更科学更精确地帮助酒精中毒病人确定发病原因；还能够在某些时候帮助实现用药安全，以免在治疗疾病的同时再造成其他疾病的发生。

一直以来，硝酸甘油作为首选的一线用药，在临床上被广泛地用作抗心绞痛的治疗，但该药的临床疗效常因人而异。研究显示，中国汉族人群中，硝酸甘油含服无效的比例高达25％以上，而ALDH2基因多态性与部分国人含服硝酸甘油治疗心绞痛无效相关。研究表明乙醛脱氢酶是硝酸甘油在人体内生物代谢的关键酶，ALDH2基因多态性会导致乙醛脱氢酶活性显著降低，从而影响硝酸甘油治疗心绞痛的疗效。因此，检测ALDH2基因型，可以为医生临床使用硝酸甘油提供参考，减少用药无效导致的意外死亡。

检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性对硝酸甘油的临床用药及指导人们健康饮酒具有重要的意义。目前已有很多种检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性的方法，如测序法、毛细管电泳法、基因芯片法等，但其用于检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性存在操作复杂、易污染、成本高等特点，因此需要建立一种检测特异性和灵敏度高、准确性和精密度好、操作简单、快速、无污染、成本低廉，且可实现多个位点同时检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种同时检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性的检测引物探针，以克服现有技术检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性操作复杂、易污染、成本高等问题。

本发明还要解决的技术问题是提供一种检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性的方法。

TaqMan-MGB探针法检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性的引物，包括如下引物和探针：

用于扩增ADH1B基因rs1229984多态性位点的引物：其核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；

用于扩增ALDH2基因rs671多态性位点的引物：其核苷酸序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；

检测ADH1B基因rs1229984位点多态性的TaqMan-MGB探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示；

检测ALDH2基因rs671位点多态性的TaqMan-MGB探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示；

其中SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7在5’末端标记Fam信号，SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8在5’末端标记VIC信号；

其中，引物SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和探针SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6在同一管中共同使用；引物SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和探针SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8在同一管中共同使用。

上述TaqMan-MGB探针法检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性的引物在检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性中的应用。

一种TaqMan-MGB探针法检测ADH1B基因和ALDH2基因多态性的试剂盒，包括权利要求1所述的引物和探针以及如下试剂：2x PCR反应混合液、阳性标准品。

其中，所述2x PCR反应混合液的配方如下：PCR反应缓冲液、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺和dNTPs。