[发明专利]一种白蛋白结合肽-人睫状神经营养因子融合蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种白蛋白结合肽-人睫状神经营养因子融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括白蛋白结合肽、人睫状神经营养因子和柔性肽段；

所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述白蛋白结合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述人睫状神经营养因子的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。

4.一种核酸片段，其特征在于，所述核酸片段编码如权利要求1-3中任一项所述的融合蛋白。

5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有至少一个拷贝的如权利要求4所述的核酸片段。

6.一种重组的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求5所述的表达载体。

7.一种如权利要求1-3中任一项所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)以PCR重叠扩增法构建权利要求1-3中任一项所述的融合蛋白的表达载体；

(2)将重组载体转化到克隆菌种，筛选含有所述融合蛋白基因序列的阳性转化菌；

(3)从所述阳性转化菌中提取所述重组载体，并转化到表达菌中，得到含有所述融合蛋白的基因序列的阳性表达菌，对所述阳性表达菌扩大培养，诱导所述融合蛋白表达；

(4)融合蛋白的表达及纯化。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体为在pET-28a的基础上构建；

所述的纯化为疏水层析和亲和层析；

所述疏水层析的层析柱为辛基层析柱；

所述亲和层析为Ni亲和层析。

9.一种药物组合物，其特征在于，所述组合物包括如权利要求1-3中任一项所述的融合蛋白、如权利要求书4所述的核酸片段、如权利要求5所述的表达载体或如权利要求6所述的重组的宿主细胞；

10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

11.如权利要求1-3中任一项所述的融合蛋白、如权利要求书4所述的核酸片段、如权利要求5所述的表达载体、如权利要求6所述的重组的宿主细胞或如权利要求9或10所述的药物组合物在制备治疗神经退化性疾病和/或肥胖疾病的药物中的应用；

所述神经退化性疾病为帕金森、阿尔茨海默或肌萎缩性脊髓侧索硬化中的任意一种或至少两种的组合。