[发明专利]一种检测猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原菌含量的选择性培养基及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于动物医学的微生物生产领域，具体公开了一种检测猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原菌含量的选择性培养基及其制备方法和应用。

背景技术

猪丹毒(Swine erysipelas,SE)是由猪丹毒杆菌(Erysipelothrix rhusiopathiae,ER)引起的一种急性热性传染病，其主要特征为高热、急性败血症、皮肤疹块(亚急性)、慢性疣状心内膜炎及皮肤坏死与多发性非化脓性关节炎(Wood R.L.,Erysipelas,in:Leman,et al.(Eds.),Diseases of swine,Iowa State University Press,Ames,Iowa,1992,pp.475–486)。从这些症状的猪体内分离到的猪丹毒杆菌大多为血清1型(1a亚型和1b亚型)和2型(Takashi et al.,Protection Effect of NaOH-Extracted Erysipelothrix rhusiopathiae J.Vet.Med.Sci.60(1):9-14.1998)。本病曾经被称为我国“三大传染病”之一，近年来，随着养猪集约化发展猪丹毒逐渐淡出人们的视野，但该病并没有完全被净化，在全国各地区一直都有零星出现，给养猪户造成了严重的经济损失(龚平阳，王连想，阳志香.广东地区猪场猪丹毒的发病特点及综合防控措施[J].畜禽业总，2010(11)：11－12.)。

目前预防该疾病主要采用猪丹毒杆菌弱毒疫苗来进行免疫防控，我国采用的疫苗主要为猪丹毒弱毒疫苗株G4T10株，该疫苗株是由江苏省农业科学院和南京生物药品厂在20世纪70年代联合研制而成，猪丹毒弱毒株G4T10是强毒株经豚鼠370代和在含有0.01％～0.04％吖啶黄血液琼脂培养基上传10代获得的。

为了简化多次疫苗注射，在中国兽药监察所主持下，华东农业科学研究所，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，南京、成都、郑州和兰州等生药厂(1974-1978)年共同参与研制成了猪瘟、猪丹毒、猪肺疫三联活疫苗。联合疫苗中所用的菌、毒株为猪丹毒G4T10株、猪肺疫EO630及猪瘟兔化弱毒。三种菌、毒液按一定比例混合后分装冻干而成。也可根据实际防疫血药配制二联苗。联苗接种免疫猪所产生的抗各个病原的免疫力，与各个单苗接种引起的免疫力在强度上基本一致，说明三者之间无相互干扰现象。并且本实验室前期实验结果显示三联苗免疫能分别抵抗猪瘟和猪丹毒温氏分离株的攻击。

目前，生产上常用猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗对猪瘟猪丹毒猪肺疫三种疾病进行免疫防控，猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗对养殖业的贡献不可小窥，其免疫效果直接关系广大养殖户的利益。公知的，疫苗的免疫效果最根本的决定因素是疫苗中有效抗原的含量，但现有技术中并没有一种有效的方法能对疫苗中猪丹毒抗原进行很好地监测。

由此可见，现有技术存在很大不足。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种检测猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原菌含量的选择性培养基及其制备方法，以及将该选择性培养基应用于实验室检测的方法；该选择性培养基及检测方法在商品化猪瘟猪丹毒猪肺疫三联苗中猪丹毒和猪肺疫混合在一起的情况下，仍旧能够对猪丹毒抗原菌进行准确测定，重复性好，准确度高，为生产中监测疫苗质量稳定提供依据。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种检测猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原菌含量的选择性培养基，包括下列组分：TSA(胰蛋白胨大豆琼脂)29-40mg/ml，牛血清3％～5％，卡那霉素20～80μg/mL，无菌双蒸水适量。

进一步的，所述选择性培养基，包括下列组分：TSA(胰蛋白胨大豆琼脂)30mg/ml，牛血清5％，卡那霉素50μg/mL，无菌双蒸水适量。

进一步的，所述选择性培养基的制备方法包括：称取TSA粉末溶于适量灭菌双蒸水中，于121℃高压16～21min，待其自然放凉至45-55℃，加入牛血清和卡那霉素，搅拌均均即可。

进一步的，所述选择性培养基的制备方法包括：称取TSA粉末溶于适量灭菌双蒸水中，于121℃高压16min，待其自然放凉至50℃，加入牛血清和卡那霉素，搅拌均均即可。

进一步的，所述选择性培养基，在准确测定猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗中抗原菌含量中的应用。

进一步的，所述选择性培养基应用于测定猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗中猪丹毒抗原菌含量的方法，包括以下操作：

1)按所述配比备料，用所述制备方法制备选择性培养基，待用；