[发明专利]一种基于数字PCR芯片的基因甲基化程度定量方法在审
| 申请号： | 201710183073.2 | 申请日： | 2017-03-24 |
| 公开（公告）号： | CN106916893A | 公开（公告）日： | 2017-07-04 |
| 发明（设计）人： | 毛红菊;武振华;赵建龙 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所31233 | 代理人： | 黄志达,魏峯 |
| 地址： | 200050 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 数字 pcr 芯片 基因 甲基化 程度 定量 方法 | ||
1.一种基于数字PCR芯片的基因甲基化程度定量方法，包括：
(1)针对待检测的目的基因，确定富含甲基化敏感性限制性内切酶切割位点的区域，并对该区域设计引物与taqman探针；
(2)将待检测样本分成两份，其中一份经甲基化敏感性限制性内切酶处理，另一份不处理；(3)利用数字PCR芯片分别对两份样本进行定量检测，最终计算出样本中目的基因的甲基化程度。
2.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR芯片的基因甲基化程度定量方法，其特征在于：所述步骤(1)中的taqman探针两端分别修饰FAM荧光分子和BHQ荧光淬灭剂分子。
3.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR芯片的基因甲基化程度定量方法，其特征在于：所述步骤(3)中的数字PCR芯片为采用PDMS制作的阵列式数字PCR微流体芯片。
4.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR芯片的基因甲基化程度定量方法，其特征在于：所述步骤(3)中的PCR芯片反应体系为：10μL罗氏480probs master mix，0.5μL浓度为10μM前引物与后引物，0.5uL浓度为10μM的taqman探针，并加水至总体积为20μL。
5.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR芯片的基因甲基化程度定量方法，其特征在于：所述步骤(3)中的计算方法为：统计两份样本中的拷贝数，从未经处理的样本的定量结果得到甲基化与非甲基化等位基因总数，从经处理的样本的定量结果得到样本中的甲基化拷贝数，两者相除，最终得到样本中甲基化等位基因的百分比，即样本的甲基化程度。
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