[发明专利]一种利用小孢根霉少孢变种降解玉米赤霉烯酮的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物降级技术领域，更具体涉及一种利用小孢根霉少孢变种降解玉米赤霉烯酮的方法。

技术背景

霉菌毒素是产玉米、小麦等谷物上生长繁殖过程中产生的次级代谢产物。我国常见的几种霉菌毒素和对动物危害比较严重的霉菌毒素有：玉米赤霉烯酮(ZEA)、呕吐毒素、黄曲霉毒素B₁、伏马毒素、赭曲霉毒素以及T-2毒素。饲料中霉菌毒素的污染及其危害是全球性的问题，在我国南方大部分地区夏天炎热潮湿，对于霉菌的生长提供了有利条件。所以在我国南方地区受霉菌毒素的污染十分严重。而我国对于霉菌毒素产毒条件的控制不足，霉菌毒素的污染对食品和饲料生产造成损失十分巨大，已经成为阻碍我国农业发展的难题之一。霉菌毒素降低饲料的营养价值，影响饲料的适口性，霉菌毒素沉积的含量过高引发畜禽的毒性反应，降低动物的采食量和饲料的转化率，减缓畜禽的生长速度，破坏畜禽免疫力和抵抗力。影响动物的生长发育和繁殖能力，甚至增加畜禽的死亡率，造成器官坏死，贫血和抑制细胞中遗传信息的传递，干扰遗传物质DNA、RNA的合成，进而干扰蛋白质的合成，对人和畜禽产生毒害。

ZEA，又称为F-2毒素，是一类具有类雌激素作用的2,4二经基苯甲酸内醋化合物。玉米、小麦、燕麦和大麦等作物易受到玉米赤霉稀酮污染。ZEA为白色晶体溶点161-163℃，溶于碱性溶液、甲醇、乙醚、乙醇和苯等，不溶于水，ZEA具有热稳定性，在词料加工过程中不易被分解。ZEA具有很强的生殖毒性和免疫毒性。尤其母猪对ZEA最敏感。影响母猪孕酮的分泌和子宫的功能。降低黄体生成素。由于玉米赤霉烯酮对育种的家畜和家禽危害很大，常常可以导致一个育种基地一年内恢复不到原有的水平，而且造成大面积的品质下降。因此，对玉米赤霉烯酮的毒害作用应给予积极防治，减少畜产品的损失。另一方面，可以利用玉米赤霉烯酮在农作物生产方面的调控作用，开发出高产高质的新产品。

现在饲料工业中采取添加霉菌毒素的吸附剂，以降低摄入畜禽体内霉菌毒素的作用。其中效果好的有活性炭和一些高聚合物(比如蒙脱石)等，现在使用较多的是一些非金属无机矿物和有几聚糖，如硅铝酸盐(因为其良好的电负性)和不同来源的寡聚糖(因为其巨大的表面积和众多的化学键)，但是有其负面效应；其次是沸石，沸石具有良好的选择吸附、阳离子交换、催化激活、耐酸、热稳定性和分子筛等物理化学性质和功能特性，包括饲料工业在内的许多领域中得到广泛应用，但是效果都不太明显。现阶段对于霉菌毒素的脱毒分为物理脱毒和化学处理法，都有不同程度的缺陷，而本制备方法通过微生物对饲料原料的发酵来降解霉菌毒素的沉积。从饲料制备的根本上解决这一难题，有很大的帮助。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用小孢根霉少孢变种降解玉米赤霉烯酮的方法，使用该方法可用于降解各种饲料中污染玉米赤霉烯酮，并且制备及应用方法简单，操作方便、成本低廉，为动物饲料降解玉米赤霉烯酮提供了有效方法，该霉菌容易生长和培养，并且能高密度发酵、提高饲料的营养成分、减少霉菌毒素的含量。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种利用小孢根霉少孢变种降解玉米赤霉烯酮的方法，步骤如下：

A.将小孢根霉少孢变种(Rhizopus microsporus var.oligosporus)活化培养：用无菌吸管吸取灭菌PBS缓冲液，滴入放有小孢根霉少孢变种冻干粉的安瓿管内，PBS缓冲液与小孢根霉少孢变种冻干粉的用量比例为0.2～0.5ml：2g，轻轻振荡，使冻干小孢根霉少孢变种菌体溶解呈悬浮状；

B.扩大培养：将步骤A中活化后的菌种接种于121℃高压湿热灭菌后冷却至30-40℃的马铃薯葡萄糖琼脂PDA培养基中扩大培养，28℃，72小时培养至对数生长期；

所述PDA培养基按照下列比例组成：马铃薯浸出粉5.0g；葡萄糖20g；琼脂14g在室温25℃中pH值为5.6±0.2；配制方法：称取PDA7.8g于200mL蒸馏水或去离子水中加热至完全溶解，PDA与蒸馏水或去离子水的比例为7.8g：200mL，分装，121℃高压灭菌15分钟，灭菌结束后摇匀，以防琼脂沉积于器皿底部而凝固，备用

C.将生长至对数生长期的菌种用PBS缓冲液洗涤至250mL锥形瓶中，菌液浓度为1×10⁶cfu/mL-1×10⁷cfu/mL，取混合均匀菌液接种至粉碎玉米中，在28-30℃进行固体发酵，所述的玉米原料中添加了无菌水，菌液、玉米和无菌水的用量比例为10mL：200g：70mL，121℃高压湿热灭菌后冷却至30-40℃。