[发明专利]用于制备柯萨奇病毒A16型病毒样颗粒的核酸构建体和方法

权利要求书

1.一种核酸构建体，其包含如下的核酸分子1至4：

核酸分子1：编码柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP1，

核酸分子2：编码柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP2，

核酸分子3：编码柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP3，和

核酸分子4：编码柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP4；

并且从5’端开始，所述核酸构建体依次包含：

RBS序列、SUMO编码序列、核酸分子3；

RBS序列、SUMO编码序列、核酸分子1；

RBS序列、SUMO编码序列、核酸分子2；以及

RBS序列、SUMO编码序列、核酸分子4。

2.根据权利要求1所述的核酸构建体，其特征在于如下的(1)-(2)项中的任意一项或者多项：

(1)所述核酸分子1至4各自独立地为单拷贝或多拷贝；

(2)所述核酸构建体还包含可操作地连接的1个或多个调控序列。

3.根据权利要求2所述的核酸构建体，其中，第(1)项中，所述多拷贝为2、3、4或5拷贝。

4.根据权利要求1所述的核酸构建体，其中，所述核酸分子1至4均为单拷贝。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的核酸构建体，其特征在于如下的1)-3)项中的任意一项或者多项：

1)柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，

柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，

柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，和/或

柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP4的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；

2)所述RBS序列为AAGGAG；

3)所述SUMO的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的核酸构建体，其中，

核酸分子1的序列如SEQ ID NO:5所示，

核酸分子2的序列如SEQ ID NO:6所示，

核酸分子3的序列如SEQ ID NO:7所示，和/或

核酸分子4的序列如SEQ ID NO:8所示。

7.根据权利要求5所述的核酸构建体，其中，第3)项中，所述SUMO的编码序列如SEQ IDNO:10所示。

8.根据权利要求1所述的核酸构建体，其中，所述核酸构建体的核苷酸序列如SEQ IDNO:11所示。

9.一种重组载体，其包含权利要求1至8中任一项所述的核酸构建体。

10.根据权利要求9所述的重组载体，其为重组表达载体。

11.一种重组宿主细胞，其包含1至8中任一项所述的核酸构建体，或者包含权利要求9或10所述的重组载体。

12.根据权利要求11所述的重组宿主细胞，其为重组大肠杆菌细胞。

13.选自如下的(1)至(4)中任一项所述的方法：

(1)一种串联共表达柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP1、VP2、VP3和VP4的方法，包括使用权利要求1-8中任一项所述的核酸构建体、权利要求9或10所述的重组载体或者权利要求11或12所述的重组宿主细胞的步骤；

(2)一种纯化柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP1、VP2、VP3和VP4的方法，包括下述步骤：将方法(1)中表达的蛋白产物进行亲和色谱纯化、去除小分子蛋白融合标签后进行亲和色谱纯化和疏水色谱纯化；

(3)一种制备柯萨奇病毒A16型的病毒样颗粒的方法，包括前面(1)至(2)中所述的步骤；

(4)一种制备手足口病疫苗的方法，包括前面(1)至(3)中所述的步骤。