[发明专利]一种转基因小麦和棉花的检测方法

权利要求书

1.一种用于小麦和棉花转基因检测的引物探针组合物，其特征在于，所述的引物探针组合物包含有检测外源bar基因的引物和探针、检测外源nos基因的引物和探针、检测外源Mon531基因的引物和探针或检测外源Mon15985基因的引物和探针中的任一种或几种，

其中：检测外源bar基因的引物和探针，其核酸序列分别为SEQ ID NO:4-6；

检测外源nos基因的引物和探针，其核酸序列为SEQ ID NO:7-9；

检测外源Mon531基因的引物和探针，其核酸序列分别为SEQ ID NO:13-15；

检测外源Mon15985基因的引物和探针，其核酸序列分别为SEQ ID NO:16-18。

2.如权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述的引物探针组合物还包含有检测内源Wx012基因的引物和探针和/或检测内源Acp1基因的引物和探针。

3.如权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述的检测内源Wx012基因的引物和探针，其核酸序列分别为SEQ ID NO:1-3；

检测内源Acp1基因的引物和探针，其核酸序列分别为SEQ ID NO:10-12。

4.如权利要求1-3任一项所述的引物探针组合物，其特征在于，所述的探针的5′端均修饰有报告基团，3′端均修饰有淬灭基团。

5.如权利要求4所述的引物探针组合物，其特征在于，所述的报告基团包含有FAM、FITC、JOE、CY3、CY5、ROX。

6.如权利要求4所述的引物探针组合物，其特征在于，所述的淬灭基团包含有TAMRA，BHQ、Eclipse。

7.权利要求1所述的引物探针组合物在制备检测小麦和棉花转基因制品中的应用。

8.一种用于检测小麦和棉花转基因的制品，其特征在于，所述的制品中包含有权利要求1所述的引物探针组合物。

9.一种鉴别小麦、棉花转基因的检测方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：

1)提取待检样本的基因组DNA，

2)将步骤1)提取的基因组DNA加入到鉴别小麦、棉花转基因检测的反应体系中，利用六重实时荧光定量PCR法检测，判读是否检出转基因成分；反应体系中添加了权利要求1所述的引物探针组合物；

3)收集PCR扩增过程中的荧光信号，通过荧光信号鉴别样本中是否含有外源基因。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中按以下方式判读是否检出转基因成分：

1)测试样品中内源基因检测Ct值小于等于36，外源基因检测Ct值大于或等于40，判断该样品不含所检外源基因；

2)测试样品中内源基因检测Ct值小于等于36，外源基因检测Ct值小于或等于40，判断该样品含所检外源基因；

3)测试样品中内源基因检测Ct值在36～40之间，应调整模板浓度，重做实时荧光PCR，再次扩增后的外源基因Ct值仍小于40，且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常则可判定为该样品检出所检外源基因；若再次扩增后的外源基因Ct值仍大于或等于40，且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常则可判定为该样品未检出所检外源基因。