[发明专利]一种转基因小麦和棉花的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于转基因检测技术领域，具体涉及一种转基因小麦和棉花的检测方法。

背景技术

自1983年世界首例转基因植物问世以来，商品化转基因植物逐渐增多，由此衍生出来的转基因食品也越来越多。转基因食品是由转基因生物生产和加工形成的。从人体安全方面来看，基因的某种转移也许会产生新的毒素和过敏原，引起意想不到的中毒或过敏反应，这种食品某些营养成分或营养质量可能产生变化，使人体出现某种病症，而且疾病可能有很长时间的潜伏期，且毒性物质对人体的危害也需要一个积累的过程才能实现。因此其安全性问题引起了全世界的普遍关注。我国为此也制定了《农业转基因生物安全管理条例》，并考虑对转基因食品进行标签标识。对转基因食品贴示标签，区分转基因与非转基因食品，或对食品中转基因含量的多少加以限制，这都需要有准确、有效的检测方法。随着转基因产品的不断市场化，建立有效的检测方法，是进一步加强我国在转基因食品监管方面的重要技术保障。常用的转基因检测方法主要有两大类：一类是蛋白质水平的检测，如酶联免疫法(ELISA法)和胶体金试纸法。另一类是核酸水平的检测，如PCR定性方法和实时荧光定量PCR方法。随着转基因新品种的研究和不断问世，仍需要深入、扩大开展转基因食品检测技术的研究，建立新型、实用、高通量的检测方法。特别是在对转基因背景一无所知的情况下，需要提高对各种候选待检目标逐一筛查检测的工作效率。

发明内容

本发明的目的是提供一种转基因小麦和棉花的检测方法，即使用引物探针组合物来快速检测小麦、棉花中是否含有外源基因，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种用于小麦和棉花转基因检测的引物探针组合物，其中包含有:

检测内源Wx012基因的引物和探针，其序列分别为SEQ ID NO:1-3；

检测外源bar基因的引物和探针，序列分别为SEQ ID NO:4-6；

检测外源nos基因的引物和探针，序列为SEQ ID NO:7-9；

检测内源Acp1基因的引物和探针，其序列分别为SEQ ID NO:10-12；

检测外源Mon531基因的引物和探针，其序列分别为SEQ ID NO:13-15；

检测外源Mon15985基因的引物和探针，其序列分别为SEQ ID NO:16-18；

上述所述各基因特异探针的5′端均修饰有报告基团，3′端均修饰有淬灭基团。

报告基团包含有FAM、FITC、JOE、CY3、CY5、ROX，淬灭基团包含有TAMRA，BHQ、Eclipse等。

上述的引物探针组合物还可以用来制备小麦和棉花转基因检测的制品。

本发明再一个方面提供了一种鉴别小麦、棉花转基因的检测方法，包括如下的步骤：

1)提取待检样本的基因组DNA，

2)将步骤1)提取的基因组DNA加入到鉴别小麦、棉花转基因检测的反应体系中，利用六重实时荧光定量PCR法检测，判读是否检出转基因成分；反应体系中添加了上述的引物和探针组；

3)收集PCR扩增过程中的荧光信号，通过荧光信号鉴别样本中是否含有外源基因；

上述步骤2)的反应条件如下：95℃3min，1个循环。95℃15s，60℃60s，40个循环。

上述方法中，按以下方式判读是否检出转基因成分：

1)测试样品中内源基因检测Ct值小于等于36，外源基因检测Ct值大于或等于40，判断该样品不含所检外源基因。

2)测试样品中内源基因检测Ct值小于等于36，外源基因检测Ct值小于或等于40，判断该样品含所检外源基因。

3)测试样品中内源基因检测Ct值在36～40之间，应调整模板浓度，重做实时荧光PCR，再次扩增后的外源基因Ct值仍小于40，且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常则可判定为该样品检出所检外源基因。若再次扩增后的外源基因Ct值仍大于或等于40，且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常则可判定为该样品未检出所检外源基因。