[发明专利]桔小实蝇Taiman基因和其可变剪切体检测方法及其dsRNA

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及桔小实蝇Taiman基因和其可变剪切体检测方法及其dsRNA。

背景技术

桔小实蝇(Bactrocera dorsalis)作为我国重要的检疫性害虫，在水果和蔬菜产业方面的危害最为严重，也被认为是我国国际贸易中农产品出口和国内农业的可持续发展中重要的制约因子。桔小实蝇以其寄主范围广、繁殖能力强和世代重叠的特点，使防治的难度大大加大。近年来，主要使用化学防治的方法对于桔小实蝇的治理，虽然简单方便，但长期使用单一药剂，抗药性日益上升为亟待解决的问题。

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是近年来发现的一种重要基因沉默手段，是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(dsRNA，Double-stranded RNA，双链核糖核酸)诱发的、同源RNA高效特异性降解的现象，是通过dsRNA的介导特异性的降解对应序列的mRNA。由于使用RNAi技术可以特异性抑制特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和基因治疗领域。

保幼激素(Juvenile hormone,JH)是调控昆虫发育、变态与生殖最重要的激素之一。在昆虫幼虫期，JH阻止由蜕皮激素(Ecdysone)引起的变态，从而使幼虫蜕皮后仍然维持幼虫形态。在幼虫最后一次蜕皮前，JH滴度降低或缺失，导致全变态昆虫化蛹和不完全变态昆虫羽化为成虫。保幼激素在全变态和不全变态昆虫生长发育变态过程中不可或缺，所以保幼激素信号通路Taiman基因的功能研究有利于我们了解保幼激素作用机理。由于人类、高等动物、植物并不含有保幼激素，故保幼激素信号通路基因作为害虫的靶标相对安全，基于该途径研发的新型杀虫剂，应用于害虫的防治具有很大的潜力，但是目前针对桔小实蝇保幼激素通路Taiman基因的相关研究较少，也未见针对桔小实蝇保幼激素信号通路Taiman基因的dsRNA的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种桔小实蝇Taiman基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:11或12或13或14所示。

在本发明的第一方面，提供一种如SEQ ID NO:11或12或13或14所示的桔小实蝇Taiman基因全长的分段扩增引物对，其特征在于，共计5对引物，引物BdTaiS1-F、BdTaiS1-R、BdTaiS2-F、BdTaiS2-R、BdTaiS3-F、BdTaiS3-R、BdTaiS4-F、BdTaiS4-R、BdTaiS5-F、BdTaiS5-R的序列依次如SEQ ID NO:1～10所示。

在本发明的另一方面，提供一种如SEQ ID NO:11或12或13或14所示的桔小实蝇Taiman基因的dsRNA，为由序列如SEQ ID NO:18所示的核苷酸和与其序列互补的核苷酸组成的双链RNA。

本发明还提供了SEQ ID NO:18所示的桔小实蝇Taiman基因的dsRNA的合成方法，包括如下步骤：提取桔小实蝇的总RNA，反转录成为cDNA作为扩增模板，以序列为SEQ ID NO:16的上游引物和以序列为SEQ ID NO:17的下游引物进行PCR扩增，PCR扩增产物进行电泳后回收产物，以胶回收产物为模板合成得到桔小实蝇Taiman基因的dsRNA。

本发明还提供了一种如SEQ ID NO:11或12或13或14所示的桔小实蝇Taiman基因进行qRT-PCR检测的方法，qPCR中的使用的上下游引物为BdTai-core-F、BdTai-core-R，其序列分别如SEQ ID NO:27、28所示。

本发明还提供了一种针对SEQ ID NO:11所示的桔小实蝇Taiman基因进行qRT-PCR检测的方法，qPCR中的使用的上下游引物为BdTaiA-F、BdTaiA-R，其序列分别如SEQ ID NO:29、30所示。

还提供了一种针对SEQ ID NO:12所示的桔小实蝇Taiman基因进行qRT-PCR检测的方法，qPCR中的使用的上下游引物为BdTaiB-F、BdTaiB-R，其序列分别如SEQ ID NO:31、32所示。

还提供了一种针对SEQ ID NO:13所示的桔小实蝇Taiman基因进行qRT-PCR检测的方法，qPCR中的使用的上下游引物为BdTaiC-F、BdTaiC-R，其序列分别如SEQ ID NO:33、34所示。

还提供了一种针对SEQ ID NO:14所示的桔小实蝇Taiman基因进行qRT-PCR检测的方法，qPCR中的使用的上下游引物为BdTaiD-F、BdTaiD-R，其序列分别如SEQ ID NO:35、36所示。