[发明专利]一种干旱诱导型启动子、其制备方法、重组表达载体及转化子

说明书

本发明公开了一种干旱诱导型启动子、其制备方法、重组表达载体及转化子，属于植物基因工程技术领域。所述干旱诱导型启动子的序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。所述方法包括：提取植物的基因组DNA；将所述基因组DNA通过如序列表中SEQ ID NO:2所示的上游引物和SEQ ID NO:3所示的下游引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，即所述干旱诱导型启动子。所述干旱诱导型植物的重组表达载体包括：上述的干旱诱导型启动子。所述转化子包括上述的干旱诱导型启动子。本发明实施例提供的pBdDREB启动子具有高效干旱诱导活性。

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，特别涉及一种干旱诱导型启动子、其制备方法、重组表达载体及转化子。

背景技术

干旱是限制植物生长发育的重要因子，严重的干旱灾害会造成农作物大面积的受损及减产。随着全球水资源日益匮乏和自然灾害的日趋严重，农作物的抗旱性研究显得愈来愈重要。近年来水资源短缺严重制约着我国农业的发展，因此培育对干旱胁迫耐受性较高的农作物新品种显得越发紧迫。

干旱可诱导植物体内相关基因表达，其转录调节的主要机制之一是与逆境胁迫有关的转录因子与靶基因上游启动子中关键的顺式调控元件特异结合，从而增强启动子的活性，提高目的基因的表达。启动子是控制基因表达的重要调控元件，控制着外源基因表达的起始、表达部位及表达强度。

在实现本发明的过程中，发明人发现现有技术至少存在以下问题：

现有的诱导型启动子虽然能够只在植株受到合适的诱导信号时才会表达，从而将外源基因的表达对植株的负面影响降至最小，但是现有的适用于干旱胁迫的诱导型启动子甚少，这限制了农作物抗旱育种基因资源的选择。

发明内容

为了解决现有技术中适用于干旱胁迫的诱导型启动子甚少的问题，本发明实施例提供了一种干旱诱导型启动子、其制备方法、重组表达载体及转化子。所述技术方案如下：

一方面，本发明实施例提供了一种干旱诱导型启动子，所述干旱诱导型启动子的序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

另一方面，本发明实施例提供了一种制备上述的干旱诱导型启动子的方法，所述方法包括：

提取植物的基因组DNA；

将所述基因组DNA通过如序列表中SEQ ID NO:2所示的上游引物和SEQ ID NO:3所示的下游引物进进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，即所述干旱诱导型启动子。

具体地，所述PCR扩增的反应体系包括：4.8μl ddH₂O、10μl 2×Prime Star GCBuffer、2μl浓度为2.5mM的dNTP mix、1μl浓度为10μM的所述上游引物、1μl浓度为10μM的所述下游引物、0.2μl Takara Prime Star Taq酶和1μl所述基因组DNA。

具体地，所述PCR扩增的程序为：98℃预变性5min；98℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸85s，扩增20个循环，每次循环结束后退火温度均增加0.5℃；98℃变性30s，65℃退火90s，72℃延伸85s，扩增15个循环；72℃延伸6min。

又一方面，本发明实施例提供了一种干旱诱导型植物重组表达载体，所述干旱诱导型植物重组表达载体包括报告基因和终止子，所述干旱诱导型植物的重组表达载体还包括：如序列表中SEQ ID NO.1所示的干旱诱导型启动子。

具体地，所述重组表达载体的选择标记为潮霉素抗性。

具体地，所述终止子为胭脂碱合成酶终止子。

优选地，所述表达载体以pCAMBIA1381为骨架载体。

具体地，所述报告基因为β-葡萄糖苷酸酶基因。