[发明专利]人肺腺癌早期诊断用长链非编码RNA序列及制备、应用

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种肺腺癌特异性的长链非编码RNA的精确cDNA序列、该序列的制备方法、该基因RNA干扰用短发夹片段及其应用。

背景技术

肺癌是世界上发病率和致死率最高的癌症之一，且呈现逐年上升的趋势，在我国肺癌的发病率和致死率也位居所有癌症之首。肺癌患者中的小细胞肺癌(Small Cell Lung Cancer,SCLC)约占15％，非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)约占80％，肺腺癌属于非小细胞肺癌的一种，多数腺癌起源于较小的支气管，为周围型肺癌，易发生于女性及不抽烟者。肺癌早期进行手术治疗之后的五年生存率约为40％，而发展到肺癌进展期之后术后平均生存时间仅为8个月。目前由于缺乏早期特异性诊断的方法，肺腺癌患者确诊时70％-80％的患者已经出现癌细胞远处转移的情况，错过最佳的手术时机。如何对肺腺癌患者进行早期的特异性诊断，并有效治疗手术后肺腺癌的复发和转移，已经成为亟待解决的问题。

在人类基因组的转录本当中，90％以上的基因并不具备编码蛋白的能力，他们往往被转录成非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)。依据核苷酸的长度，我们把ncRNA又分为两大类：分别为核苷酸长度少于200nt的短链非编码RNA和核苷酸长度大于200nt的长链非编码RNA(lncRNA)。过去人们对短链ncRNA的研究比较多，lncRNA一度曾被认为是基因转录时的“噪音”和“垃圾”，并不具有特定的生物学功能。随着这些年的研究发现，lncRNA在多种类型肿瘤细胞(包括乳腺癌、肝癌、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤等)的增殖、克隆、凋亡、侵袭、转移以及药物耐药等方面均发挥着重要的作用，同时由于lncRNA具有显著的肿瘤组织特异性，因此在肿瘤细胞中表达异常的lncRNA有希望作为肿瘤早期诊断标志物(特别是在某些肿瘤发生的早期)，为癌症临床诊断提供无创、快捷和低成本的筛查手段。

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是一种抑制疾病相关基因表达和诱导转录后基因沉默的有效手段。RNAi通过在细胞内由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导的降解同源序列的mRNA，从而抑制相应基因表达的现象，它是转录后基因沉默(PTGS)的一种，对于内源性基因和外源性基因均有明显沉默作用。RNA干扰不仅是基础研究的热点,也是临床应用研究的热点，国际上已经有针对癌症、眼部疾病、高胆固醇血症和急性肾损伤等多种疾病的RNAi药物进入临床阶段。

长链非编码RNA与RNA干扰技术均是肿瘤基因治疗研究的热点，找到肺腺癌异常表达的长链非编码RNA有助于更好的进行肺腺癌的早期诊断，并可通过抑制其表达进行基因治疗，具有重要的实用价值。

《长链非编码RNA在肺腺癌分子诊断/预后中的应用及功能研究》(王丽惠，广西医科大学，转化医学，2016)提供了一种用于肺腺癌的早期诊断/预后的分子标志物linc00857，linc00857是在肺腺癌中特异性高表达的长链非编码RNA，与肺腺癌病人的不良预后显著相关。然而上述文献中的技术方案还存在如下缺陷：一、精确的linc00857的全长序列对于研究linc00857在肺腺癌发生发展中的功能具有重要意义，然而上述文献中未能提供精确的linc00857的全长序列，难以满足对肺腺癌发生发展中功能研究的要求；二、上述文献中提供的分子标志物linc00857的RNA干扰靶点少，不能提供更加有效的治疗方案，影响其基因治疗效果，如上述文献中虽然提供了用于在肺腺癌细胞中干扰linc00857的siRNA序列和shRNA质粒，但其中shRNA质粒的干扰效率较低，不足50％，而siRNA虽能取得较高的干扰效率，但同shRNA干扰相比，siRNA仅能对细胞进行瞬时干扰，且不稳定性较高，易出现脱靶效应，这种脱靶效应严重影响了siRNA在肿瘤的临床基因治疗中的应用。

发明内容

为此，本发明要解决的技术问题是提供一种长链非编码RNA的基因序列、制备方法以及其用途，如基于所述长链非编码RNA的RNA干扰靶位点、RNAi的短发夹片段，以及shRNA重组质粒可用于人肺腺癌的相关治疗。

本发明提供了一种长链非编码RNA，所述长链非编码RNA的cDNA序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。所述的长链非编码RNA为linc00857精准全长cDNA序列。