[发明专利]人肺腺癌早期诊断用长链非编码RNA序列及制备、应用在审

申请号：	201710174368.3	申请日：	2017-03-22
公开（公告）号：	CN106967718A	公开（公告）日：	2017-07-21
发明（设计）人：	高山;高弈航;张常;王亮	申请（专利权）人：	中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
主分类号：	C12N15/113	分类号：	C12N15/113;C12N15/11;C12N15/63;C12Q1/68;A61K45/00;A61P35/00
代理公司：	北京三聚阳光知识产权代理有限公司11250	代理人：	李敏
地址：	215163 江苏***	国省代码：	江苏;32
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摘要：
搜索关键词：	腺癌早期诊断用长链非编码 rna 序列制备应用
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【权利要求书】：

1.一种长链非编码RNA，其特征在于，所述长链非编码RNA的cDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种可特异性识别如权利要求1所述的长链非编码RNA的引物组，其特征在于，所述引物组包括如下引物：

引物GSP1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

引物GSP2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

引物GSP3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

引物GSP4，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；

引物GSP5，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

引物GSP6，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

3.一种制备如权利要求1所述的长链非编码RNA的全长cDNA序列的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)提取肺癌细胞总RNA；

2)以步骤1)中提取的总RNA反转录为cDNA，以所述cDNA为模板，利用权利求2中所述的引物组扩增linc00857特异片段，将所述扩增的linc00857特异片段克隆至载体上，然后进行测序验证所述序列的正确性；

3)以步骤1)提取的总RNA为模板，以3'-RACE CDS Primer A为引物进行反转录，获得3'末端的cDNA；

4)以步骤3)中获得的cDNA为模板，用10X Universal Primer A Mix和引物GSP5扩增所述linc00857的3'端序列，然后克隆至载体上，通过测序获得所述linc00857的3'端序列；

5)以步骤1)提取的总RNA为模板，用反转录引物5'-RACE CDS Primer A和接头引物SMARTer II A Oligonucleotide，将所述总RNA反转录，获得5’末端的cDNA；

6)以步骤5)中获得的cDNA为模板，用10X Universal Primer A Mix和引物GSP2扩增所述linc00857的5’端序列，然后克隆至载体上，通过测序获得所述linc00857的5’端序列；

7)将上述步骤4)得到的3’末端片段和步骤6)所得到的5’末端片段拼接得到所述长链非编码RNA的全长cDNA序列。

4.权利要求1所述的长链非编码RNA在制备早期诊断或治疗人肺腺癌的产品中的用途。

5.一种引物对，其特征在于，所述引物对用于检测权利要求1所述的长链非编码RNA在细胞和组织中的表达水平；所述引物对包括上游引物linc00857-F和下游引物linc00857-R，所述上游引物linc00857-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述下游引物linc00857-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

6.一种用于人肺腺癌早期诊断的试剂盒，其特征在于，包括权利要求5所述的引物对。

7.一种用于人肺腺癌早期诊断的qRT-PCR反应体系，其特征在于，包括：

Green dye，10μL；

权利要求5中所述的上游引物linc00857-F，10μM,0.4μL；

权利要求5中所述的下游引物linc00857-R，10μM,0.4μL；

ROX，0.4μL；

模板，2μL；

dH₂O，6.8μL。

8.一种如权利要求1所述的长链非编码RNA的RNAi靶位点的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.10或SEQ ID NO.11所示。

9.一种可用于权利要求1所述的长链非编码RNA序列RNAi用的短发夹片段，其特征在于，所述短发夹片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.12或SEQ ID NO.13所示。

10.权利要求8所述的RNAi靶位点的核苷酸序列或权利要求9所述的RNAi用的短发夹片段在制备治疗肺腺癌疾病的药物中的用途。

11.包含权利要求1、8或9所述的核苷酸序列的载体。