[发明专利]一种测定人血清中HER‑2ECD浓度水平的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种测定人血清中HER-2 ECD浓度水平的试剂盒。

背景技术

HER-2 ECD是HER-2蛋白胞外区域受蛋白酶裂解，从细胞表面脱落至血液中形成的可溶性糖蛋白。血清HER-2 ECD检测具有与肿瘤组织HE试剂R2检测相关性好且易于实时动态检测的优点，是组织学检测的一种重要补充。目前市场上检测血清HER-2 ECD的方法主要是化学发光法，西门子ADVIA HER-2/neu血清学化学发光检测系统是目前全球唯一获得美国食品药品监督管理局（FDA）认证的血清学检测产品，用于监测管理初始血清水平大于15ng/ml的转移性乳腺癌患者。该方法由于试剂仪器系统封闭，进口试剂仪器成本高昂，操作繁琐，限制其临床大规模运用及推广。

本发明是一种全新的人血清HER-2 ECD检测试剂盒，采用4株针对HER-2 ECD不同表位的单克隆抗体制备的胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，灵敏度高，特异性好，且具有与西门子检测结果很高的一致性。本发明系开放的检测系统，可以在全自动生化分析仪及特定蛋白分析仪上进行，大大提高操作简便性，降低了检测成本。

发明内容

本发明目的是为了克服现有技术的不足而提供一种抗体亲和力及特异性好、方法灵敏度高、稳定性好的测定人血清中HER-2 ECD浓度水平的试剂盒。

该检测方法,是通过鼠抗人HER-2 ECD单克隆抗体与胶乳颗粒偶联,采用胶乳增强比浊法来测定人体血清中HER-2 ECD的含量,运用该方法的试剂不需要预处理标本,操作简单,准确度高,重复性好,且能够在全自动生化分析仪或者特种蛋白仪上使用。

为达到上述目的，本发明采用了如下技术方案。

一种测定人血清中HER-2 ECD浓度水平的试剂盒，包含试剂R1、试剂R2及校准品Cal，所述试剂R1组份包括纯化水、生物缓冲剂、促凝剂、抑凝剂和防腐剂；所述试剂R2组份包括纯化水、生物缓冲剂、包被鼠抗人HER-2 ECD协同单克隆抗体的致敏胶乳颗粒、稳定剂、助悬剂、表面活性剂和防腐剂；所述校准品Cal组份包括纯化水、生物缓冲剂、稳定剂、防腐剂以及根据赋值需要添加的一定浓度梯度的重组HER-2 ECD蛋白。

优选地，所述试剂R1组分中生物缓冲剂为2-(N-吗啡啉)乙磺酸，促凝剂为聚乙烯吡咯烷酮K30，抑凝剂为氯化钠，防腐剂为叠氮钠。

本发明所述的生物缓冲剂能够使反应体系维持一定的PH值，各种能使反应体系PH值稳定的物质均能作为本发明的生物缓冲剂。为了使试剂盒的各项性能最佳，本发明中的生物缓冲剂优选为2-(N-吗啡啉)乙磺酸。

本发明所述的促凝剂是指能够促进胶乳颗粒发生凝集反应从而提高试剂灵敏度的一类物质，多种高分子聚合物均可以用作促凝剂，如聚乙二醇6000，聚乙二醇2000，聚乙烯醇等，为了使试剂盒的各项性能最佳，本发明中的促凝剂优选为PVP K30。

本发明所述的抑凝剂是指能够抑制胶乳颗粒发生凝集反应从而降低非特异性反应的一类物质，如一价盐、二价盐、甘油、泊洛沙姆等，为了使试剂盒的各项性能最佳，本发明中的抑凝剂优选为氯化钠。

本发明所述的防腐剂是指能够抑制液体制剂中微生物生长及繁殖以防止试剂污染导致性能变化的一类物质，如苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、叠氮钠、Proclin 300等，为了使试剂盒的各项性能最佳，本发明中的防腐剂优选为叠氮钠。

进一步地，1L 试剂R1组分中2-(N-吗啡啉)乙磺酸 5~10g，PEG20000为1-10g，氯化钠为1-100g，叠氮钠为1g，其余为纯化水，试剂R1用氢氧化钠或稀盐酸调节 PH为5.0~7.0。

本发明所述的抗人HER-2 ECD抗体是指能够与人血清中HER-2 ECD蛋白发生特异性的抗原抗体免疫学反应的物质，包括鼠或兔单克隆抗体，羊或兔多克隆抗体。为了使试剂盒的各项性能最佳，本发明中的抗人HER-2 ECD优选为鼠抗人HER-2 ECD单抗隆抗体。

本发明所述胶乳增强免疫比浊法是指将特定的抗体与微球连接起来，与血清样本中的靶抗原发生免疫学反应，包被抗体的微球之间进一步通过抗原进行交联并产生浊度，浊度大小与靶抗原的浓度成正比例关系，且此浊度可被全自动生化分析仪及特定蛋白分析仪检测到。由于本发明使用的是单抗，一株单抗只针对一个抗原表位，无法通过抗原形成交联。为了使试剂盒的各项性能最佳，本发明中优选的是4株针对不同表位的单抗分别连接微球后混合与血清中的抗原反应，达到多株单抗协同的效应，确保能形成浊度以被仪器检测到。