[发明专利]荧光定量RT‑PCR检测大鼠疑似泰勒氏病毒的引物对、探针、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201710173166.7 | 申请日： | 2017-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN106884058A | 公开（公告）日： | 2017-06-23 |
| 发明（设计）人： | 魏晓锋;蔡骁垚;熊炜;胡建华;张泉;其他发明人请求不公开姓名 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 上海序伦律师事务所31276 | 代理人： | 周东萍 |
| 地址： | 200241 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 荧光 定量 rt pcr 检测 大鼠 疑似 泰勒 病毒 引物 探针 试剂盒 方法 | ||
1.一种荧光定量RT-PCR检测大鼠疑似泰勒氏病毒的引物对，其特征在于，所述引物对具有如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的碱基序列。
2.一种荧光定量RT-PCR检测大鼠疑似泰勒氏病毒的探针，其特征在于，所述探针具有如SEQ ID No:3所示的碱基序列。
3.根据权利要求2所述的荧光定量RT-PCR检测大鼠疑似泰勒氏病毒的探针，其特征在于，所述探针的5’结合有FAM，所述探针的3’结合有BHQ1。
4.一种荧光定量RT-PCR检测大鼠疑似泰勒氏病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的引物对、以及权利要求2或3所述的探针。
5.根据权利要求4所述的荧光定量RT-PCR检测大鼠疑似泰勒氏病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：含有大鼠疑似泰勒氏病毒TLV NGS910毒株SEQ ID No:4所示部分基因序列的阳性重组质粒标准品。
6.一种荧光定量RT-PCR检测大鼠疑似泰勒氏病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：以大鼠脑组织的cDNA为模板，SEQ ID No:1和SEQ ID No:2为引物，SEQ ID No:3为探针，进行荧光定量PCR扩增，采集荧光信号。
7.根据权利要求6所述的荧光定量RT-PCR检测大鼠疑似泰勒氏病毒的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR扩增的反应体系为：Premix Ex Taq 10μL、ROX Reference Dye II 0.2μL、cDNA模板2μL、SEQ ID No:1引物0.4μL、SEQ ID No:2引物0.4μL、SEQ ID No:3探针0.8μL、加灭菌蒸馏水至20μL。
8.根据权利要求6所述的荧光定量RT-PCR检测大鼠疑似泰勒氏病毒的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR扩增的反应条件为：95℃预变性30sec；95℃变性5sec，60℃退火延伸34sec，40个循环。
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