[发明专利]一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法

说明书

本发明公开了一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法，属于酶活性检测领域。包括：配液，配置工作液、抑制剂溶液和混合试剂；加样本，将50uL‑70uL的工作液加入对照组反应杯；将50uL‑70uL抑制剂溶液加入实验组反应杯；向对照组反应杯和实验组反应杯分别加入10uL‑30uL的样本；温育，将对照组反应杯和实验组反应杯放置在预定温度的避光环境下孵育第一预定时间；其中，预定温度为30℃‑40℃；测定，分别向对照组反应杯和实验组反应杯加入100uL‑150uL的混合试剂后，在预定波长时测定吸光度值第二预定时间。本发明的检测方法能够适用于硫氧还蛋白还原酶活性的自动化检测。

技术领域

本发明属于酶活性检测领域，具体涉及一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法。

背景技术

硫氧还蛋白还原酶(TR)测定项目为国内外首创的临床肿瘤检测项目。该项目可以填补异常增生类疾病诊断缺乏临床检验方法的空白。

TR检测设备能够应用于体检人群的肿瘤早期筛查，住院人群的肿瘤疗效监测，复发预警及健康管理等，具有极大的市场需求和发展潜力。

现有技术《专利ZL201080049877.X：用于测定样品中硫氧还蛋白还原酶活性的方法和试剂盒及应用》是基于人工分步逐步操作实现，如：手工操作酶标仪、手工加样、手工操作避光、手工放置摇床实现摇匀，手工加样等；其用样本的各种条件也是针对手工操作过程和用量设计。由于人工手工操作包括了人工加样误差大；各种操作非连贯，容易产生中间误差；操作时间长不利于大规模临床检测应用等多种需要改善的问题，有必要研制一种用于自动生化仪的人血硫氧还蛋白还原酶活性检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够节省检测时间和检测步骤的一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法。

根据本发明实施例的一个方面，提供了一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法，包括：配液，配置工作液、抑制剂溶液和混合试剂；加样本，将50uL-70uL的工作液加入对照组反应杯；将50uL-70uL抑制剂溶液加入实验组反应杯；向对照组反应杯和实验组反应杯分别加入10uL-30uL的样本；本加样量是根据自动化的协同检测设备最佳工作所需要体积量设计。样本温育，在避光环境下，将对照组反应杯和实验组反应杯放置在30℃-40℃温度下孵育第一预定时间；测定，分别向对照组反应杯和实验组反应杯加入100uL-150uL的混合试剂；在预定波长下，测定第二预定时间段内的吸光度值。

进一步，配置工作液的步骤包括：按照1:1:2:4的比例取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、吗啉基丙磺酸、磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系和磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液；将自动化的协同检测设备三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、吗啉基丙磺酸、磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系和磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液混合均匀。

进一步，自动化的协同检测设备三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的PH为5.5-7.2，浓度为0.025-0.125mol/L；自动化的协同检测设备吗啉基丙磺酸的浓度为0.25mol/L；自动化的协同检测设备磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系的PH为2.2-8.0，浓度为0.2mol/L；自动化的协同检测设备磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液的PH为4.9-8.2，浓度为1-15mol/L。

进一步，自动化的协同检测设备配置抑制剂溶液的步骤包括：以1:1-1:5的比例混合自动化的协同检测设备工作液和抑制剂，形成自动化的协同检测设备抑制剂溶液；将自动化的协同检测设备抑制剂溶液混合均匀，自动化的协同检测设备抑制剂为硫氧还蛋白还原酶抑制剂化合物。

进一步，自动化的协同检测设备配置混合试剂的步骤包括：以1:4-1:8的比例混合自动化的协同检测设备试剂A和自动化的协同检测设备试剂B，形成自动化的协同检测设备混合试剂；将自动化的协同检测设备混合试剂混合均匀；自动化的协同检测设备A试剂为5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)或取代6,6'-二硝基-3,3'-二硫代苯甲酸；自动化的协同检测设备B试剂为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。