[发明专利]一种用于协同检测设备的硫氧还蛋白还原酶活性检测方法有效
| 申请号: | 201710172659.9 | 申请日: | 2017-03-21 |
| 公开(公告)号: | CN108627469B | 公开(公告)日: | 2021-04-02 |
| 发明(设计)人: | 尹汉维 | 申请(专利权)人: | 凯熙医药(武汉)股份有限公司;武汉尚宜康健科技有限公司;南京凯熙医学科技有限公司 |
| 主分类号: | G01N21/31 | 分类号: | G01N21/31;G01N1/38 |
| 代理公司: | 北京知元同创知识产权代理事务所(普通合伙) 11535 | 代理人: | 刘元霞 |
| 地址: | 430075 湖北省武汉市*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 用于 协同 检测 设备 硫氧还蛋白 还原酶 活性 方法 | ||
1.一种硫氧还蛋白还原酶活性检测方法用于协同检测设备中的用途,其特征在于,包括:
配液,
配置工作液、抑制剂溶液和混合试剂;
所述工作液包括三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、吗啉基丙磺酸、磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系和磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液;
所述抑制剂溶液为所述工作液和抑制剂的混合溶液;所述抑制剂为硫氧还蛋白还原酶抑制剂化合物;
所述混合试剂包括试剂A和试剂B;所述试剂A为5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)或取代6,6'-二硝基-3,3'-二硫代苯甲酸;所述试剂B为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸;
加样本,所述样本为血液、体液或组织匀浆液;
将50uL-70uL的所述工作液加入对照组反应杯;
将50uL-70uL的所述抑制剂溶液加入实验组反应杯;
向对照组反应杯和实验组反应杯分别加入10uL-30uL的样本;
温育,
在避光环境下,将所述对照组反应杯和所述实验组反应杯放置在30℃-40℃温度下孵育第一预定时间;
测定,
分别向所述对照组反应杯和所述实验组反应杯加入100uL-150uL的混合试剂;
在预定波长下,测定第二预定时间段内的吸光度值;
所述加样本、温育、测定步骤经操作所述协同检测设备自动完成。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述配置工作液的步骤包括:
按照1:1:2:4的比例取三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、吗啉基丙磺酸、磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系和磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液;
将所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、吗啉基丙磺酸、磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系和磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液混合均匀。
3.根据权利要求2所述的用途,其特征在于,
所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的PH为5.5-7.2,浓度为0.025-0.125 mol/L;
所述吗啉基丙磺酸的浓度为0.25mol/L;
所述磷酸氢二钠柠檬酸缓冲体系的PH为2.2-8.0,浓度为0.2mol/L;所述磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲溶液的PH 为4.9-8.2,浓度为1-15mol/L。
4.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述配置抑制剂溶液的步骤包括:
以1:1-1:5的比例混合所述工作液和抑制剂,形成所述抑制剂溶液;
将所述抑制剂溶液混合均匀。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途,其特征在于,所述配置混合试剂的步骤包括:
以1:4-1:8的比例混合所述试剂A和所述试剂B,形成所述混合试剂;
将所述混合试剂混合均匀。
6.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述第一预定时间为8-20分钟。
7.根据权利要求6所述的用途,其特征在于,所述第一预定时间为10分钟。
8.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述预定波长为405nm-450nm。
9.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述第二预定时间为20-30个周期。
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