[发明专利]涎液化糖链抗原测定试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种可采用胶乳增强免疫比浊法测定人血清中涎液化糖链抗原含量的涎液化糖链抗原测定试剂及其制备方法。

背景技术

KL-6(涎液化糖链抗原)属claster9MUCI类，相对分子量接近200000的糖蛋白。主要由增殖、再生的或受损的肺泡Ⅱ型上皮细胞分泌，在正常肺组织中，KL-6在II型肺泡细胞，呼吸性细支气管上皮细胞和支气管腺浆液细胞上表达。

当机体肺泡上皮细胞遭受一定程度的损伤时，一方面，Ⅱ型肺泡上皮细胞增生并激活，对KL-6的分泌快速增加；另一方面肺间质基底膜通透性增加，使KL-6开始向血液循环扩散，血清KL-6水平也出现一定程度的升高。

间质性肺炎，尤其是活动性高的病例，血清KL-6尤呈高值。健康者和无间质性肺炎、肺纤维化的呼吸系统疾病则呈低值。

KL-6是检测间质性肺炎的全新血清生物标记物(高灵敏度和高特异度)，是诊断、监测和预后的有用指标，可评估间质性肺疾病的活动性，可预测ILDs的临床转归，可提供有价值的解决方案。

KL-6的检测

KL-6是一种相对稳定的蛋白质，在-20℃下标本可以长期保存。目前有层析定性和酶免定量的检测方法可用，层析定性仅能在样本浓度超过检测限后简单确定有无，无法准确定量，不能反映病情的轻重程度及对病情进行及早的发现和治疗，而且存在较大的假阴或假阳，酶免方法主要是被科学研究者应用于科研，由于各自进行检测试剂的制备，没有统一的配方及工艺，没有对检测条件深入研究，导致不同批次试剂检测结果差异较大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种涎液化糖链抗原测定试剂及其制备方法。

为实现上述发明目的之一，本发明采用如下技术方案：

一种涎液化糖链抗原测定试剂，包括预处理试剂、抗体胶乳试剂、校准试剂；

所述预处理试剂包括缓冲剂、信号增强剂、防腐剂，所述预处理试剂的PH值为7.2-7.6；

所述抗体胶乳试剂包括缓冲剂、结合有抗人涎液化糖链抗原抗体的胶乳微球、稳定剂，所述胶乳微球直径为100-400nm；

所述校准试剂包括定量的涎液化糖链抗原。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述预处理试剂中的缓冲剂为磷酸盐、三羟甲基氨基甲烷、甘氨酸、4-羟乙基哌嗪乙磺酸中的一种，信号增强剂为聚乙二醇10000、氟化钠中的一种。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述抗体胶乳试剂中与胶乳微球结合的抗人涎液化糖链抗原抗体为鼠抗人涎液化糖链抗原单克隆抗体、羊抗人涎液化糖链抗原单克隆抗体、兔抗人涎液化糖链抗原单克隆抗体中至少一种，或者是鼠抗人涎液化糖链抗原多克隆抗体、羊抗人涎液化糖链抗原多克隆抗体、兔抗人涎液化糖链抗原多克隆抗体中至少一种。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述抗体胶乳试剂中的稳定剂为环糊精、酪蛋白、抗坏血酸中的一种或多种。

为实现上述另一发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种涎液化糖链抗原测定试剂的制备方法，分别制备预处理试剂、抗体胶乳试剂、校准试剂；

所述预处理试剂的制备方法包括以下步骤：将缓冲剂、信号增强剂、防腐剂、无机盐与水混合调配为PH值为7.2-7.6的溶液即得；

所述抗体胶乳试剂的制备方法依次包括以下步骤：

S1、将抗人涎液化糖链抗原抗体在PH8.0-9.0的碳酸氢钠缓冲溶液中，于2-8摄氏度进行至少两次透析，以除去干扰标记反应的杂质；

S2、将透析后的抗人涎液化糖链抗原抗体溶液用pH9.0-9.5的磷酸盐缓冲液稀释到1-2mg/ml，加入适量的荧光素，在25摄氏度持续、轻微混合1小时，进行标记反应以制得荧光素化抗人涎液化糖链抗原抗体溶液；

S3、将步骤S2所得溶液在pH7.5-8.0的磷酸盐缓冲液中，于2-8摄氏度进行至少两次透析，除去未反应的荧光素；

S4、将透析后的荧光素化抗人涎液化糖链抗原抗体溶液与适量的结合有抗荧光素抗体的胶乳微球溶液混合，在25摄氏度持续、轻微混合1小时，并加入稳定剂即得；

所述校准试剂的制备方法包括以下步骤：使用稀释液将涎液化糖链抗原稀释到所需浓度即得。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述抗体胶乳试剂的制备步骤S2中的荧光素为活化荧光素，用超纯水溶解后直接进行标记反应。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述抗体胶乳试剂的制备步骤S4中稳定剂为环糊精、酪蛋白、抗坏血酸中的一种或多种。