[发明专利]松材线虫SSR标记引物用于松材线虫检测的用途及松材线虫的PCR检测方法

说明书

技术领域

本发明属于植物病原检测领域，具体涉及一种松材线虫SSR标记引物用于松材线虫检测的用途及检测松材线虫的PCR检测方法。

背景技术

松材线虫病是由松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)引起的松树毁灭性病害^[1]。1934年首次被报道^[2]，1982年传入中国^[3]，以其致病能力强、传播途径广、蔓延速度快、防治难度大等特点^[4-6]，给世界林业带来巨大损失。由于松材线虫病在发病前期不易被发现和识别，并且传染性极强，对松树林区的破坏十分严重，因此尽管相关部门投入大量人力物力进行治理，然而收效甚微，松材线虫的危害仍在快速蔓延。2012年在距离黄山景区不足45公里的地方发现了疫情，松材线虫病已严重威胁到黄山景区内松林的生存。同时，各地病虫害上报情况显示，自松材线虫病1982年传入中国后，各大景区的松树频频陷入危机。因此，目前迫切需要多途径、多方式开展松材线虫的快速检测研究，以做好预防和检疫工作。SSR(Simple Sequence Repeats)标记[又名微卫星DNA(MicrosatelliteDNA)]，是近年来发展起来的一种以特异引物PCR为基础的分子标记技术^[7]，具有多态性高、重复性好、共显性高、易检测、操作简单、无放射、所用时间较短、覆盖面广等优点，在DNA指纹图谱的构建、遗传多样性分析、基因定位、分子标记辅助育种等方面已得到广泛应用^[8](Morgante et al.，1993；Milee et al.，2008；罗冉等，2010)。同时，SSR标记还具有物种专化性，是用于植物病原菌鉴定和检测的理想标记。2009年，Taisei等人^[9]发表了松材线虫全基因组序列，更为松材线虫SSR标记的开发提供了全新的资源。本发明通过对徐峻荣等人^[10]公布的可作为gSSR多态性标记的九对引物进行筛选，选出可对松材线虫DNA样本进行标记检测的引物，以开发更加快速有效的松材线虫分子检测技术与方法。

参考文献

[1]何龙喜，薛旗，吴小芹.松材线虫体内细菌对宿主繁殖和致病力的影响[J].南京林业大学学报(自然科学版),2016(03)

[2]Steiner G,Buhrer EM.Aphelenchoides xylophilus n.sp.a nematode associated with bluestain and other fungi in timber[J].J Agric Res,1934,48:949-951.

[3]Cheng H,Lin M,Li W,Fang Z.The occurrence of a pine wilting disease caused by a nematode found in Nanjing[J].For Pest and Dis,1983,4:1–5.

[4]Ye W,Giblin-Davis RM.Molecular Characterization and Development of Real-Time PCR Assay for Pine-Wood Nematode Bursaphelenchus xylophilus(Nematoda:Parasitaphelenchidae)[J].PLoS ONE,2011,8(11):e78804.doi:10.1371/journal.pone.0078804

[5]JUNG,J.,HAN,H.,RYU,S.H.&KIM,W.Microsatellite variation in the pinewood nematode,Bursaphelenchus xylophilus(Steiner and Bührer)Nickle in South Korea[J].Genes&Genomics,2010,32,147-154.

[6]Tóth.Chemical Research Center,Hungarian Academy of Sciences,Budapest,Hungary Bursaphelenchus xylophilus,the pinewood nematode:its significance and a historical review[J].Acta Biologica Szegediensis,2011,55(2):213-217