[发明专利]松材线虫SSR标记引物用于松材线虫检测的用途及松材线虫的PCR检测方法

权利要求书

1.一种松材线虫SSR标记引物用于松材线虫检测的用途，所述SSR标记引物为：

上游引物:5’-TTATCGGGCTCAATCTCGG-3’

下游引物:5’-TAGTGACCCGGGGATCTTC-3’。

2.一种检测松材线虫的PCR方法，包括以下步骤：

1)提取松材线虫基因组DNA；

2)使用TaqDNA聚合酶对步骤1)所得DNA进行扩增，PCR反应体系组成为：Taq PCR Master Mix 12.5μL，上、下游引物各0.5μL，模板DNA量为50ng，ddH₂O补充至25μL；其中，所述上、下游引物为权利要求1所述的引物，上、下游引物量均为10μM；

扩增程序为：94℃预变性3min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，共34个循环；72℃延伸5min；

3)对步骤2)所得扩增产物做电泳检测，通过电泳结果是否含有一条314bp的条带，从而检测、鉴定或鉴别是否含有松材线虫。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)所述电泳检测为1.2％琼脂糖凝胶电泳。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，还包括以下步骤4)：

4)将步骤3)所得314bp条带回收纯化，测序，通过判断测序结果是否与序列表SEQ ID NO.1所示的SSR标记基因序列相同，进一步确认松材线虫的检测、鉴定或鉴别结果。

5.一种用于检测松材线虫的试剂盒或检测系统，包括权利要求1所述的引物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒或检测系统，其特征在于，所述试剂盒或检测体统还包括PCR扩增试剂、电泳试剂和/或序列分析软件。