[发明专利]一种稳定同位素标记的隐色孔雀石绿及其合成方法

说明书

本发明公开了一种稳定同位素标记的隐色孔雀石绿及其合成方法，所述合成方法包括如下步骤：(a)稳定同位素标记的甲苯在乙酸、乙酸酐和浓硫酸的混合溶剂中，通过氧化剂氧化得到稳定同位素标记的苯亚甲基二乙酸中间体，再在乙醇和1M硫酸作用下，水解得到稳定同位素标记的苯甲醛；(b)稳定同位素标记的苯甲醛与N,N二甲基苯胺在催化剂作用下反应，结束后经后处理、分离、提纯，得到稳定同位素标记的隐色孔雀石绿。稳定同位素原子利用率高；且本发明合成步骤简单，产品容易分离提纯，满足作为定量检测隐色孔雀石绿的标准试剂的要求；使用价值高、具有良好的经济性。

技术领域

本发明涉及同位素标记领域，尤其是涉及一种稳定同位素标记的隐色孔雀石绿及其合成方法。

背景技术

孔雀石绿能抑制细胞分裂，从而产生良好的抗菌和杀菌作用，曾被广泛用于水产养殖、保鲜和运输过程。其通过食物链进入人体或动物机体后，可以通过生物转化，还原代谢成脂溶性的隐色孔雀石绿，这种三苯甲烷类物质有致突变、致畸和致癌的危险，并能在生物体内长时间残留，因此，包括我国在内的许多国家都禁止在水产养殖中使用孔雀石绿。但因其价格便宜、杀菌效果好，在水产养殖、保鲜和运输过程中仍不断被违规使用。因此，需要对孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿在水产品中的残留进行监控。

对水产品体内残留物隐色孔雀石绿的检测方法主要有高效液相色谱法、薄层色谱法、分光光度法、高效液相色谱-质谱(LC-MS)法、拉曼光谱法等，但是这些方法普遍存在灵敏度低，方法繁琐，或只能进行半定量分析等缺点。

稳定同位素稀释质谱法IDMS(Isotope Dilution Mass Spectrometry)是采用与被测物质具有相同分子结构的稳定同位素标记的化合物作为内标物质，用高分辨液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)进行检测，通过质谱仪测量相应质量数的离子的比值并与标准的比值比较达到准确定量的目的。采用同位素内标可以有效消除样品在化学和物理的前处理步骤中所引起的回收率差异，从而避免处理样品过程中的损失对检测结果造成的偏差。

稳定同位素内标的特性与LC-MS的高灵敏度和处理复杂样品的能力结合，使得色谱-同位素稀释质谱技术被公认为测量微量及痕量有机物的基准定量方法，应用越来越广泛。因此，有必要提供一种稳定同位素标记的隐色孔雀石绿-D₆，为定量检测水产品中的残留物隐色孔雀石绿提供标准试剂，从而有效的为我国食品安全领域兽药残留检测服务。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种稳定同位素标记的隐色孔雀石绿及其合成方法，合成方法简单。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种稳定同位素标记的隐色孔雀石绿-D₆，具有如下分子结构：

为解决上述技术问题，本发明还提供了一种稳定同位素标记的隐色孔雀石绿的合成方法，包括如下步骤：(a)稳定同位素标记的甲苯在乙酸、乙酸酐和浓硫酸的混合溶剂中，通过氧化剂氧化得到稳定同位素标记的苯亚甲基二乙酸中间体，再在乙醇和1M硫酸作用下，水解得到稳定同位素标记的苯甲醛；(b)稳定同位素标记的苯甲醛与N,N二甲基苯胺在催化剂作用下反应，结束后经后处理、分离、提纯，得到稳定同位素标记的隐色孔雀石绿。

进一步地，所述步骤(a)中：稳定同位素标记的甲苯为甲苯-D₈；稳定同位素标记的苯亚甲基二乙酸中间体为苯亚甲基二乙酸-D₆；稳定同位素标记的苯甲醛为苯甲醛-D₆。

进一步地，所述步骤(a)中：所述的氧化剂为三氧化铬。

进一步地，所述步骤(b)中：所述的催化剂为三氯化锑。

进一步地，所述步骤(b)中：苯甲醛-D₆标记的隐色孔雀石绿-D₆的分子结构为：