[发明专利]一种乳腺癌复发风险评估21基因检测引物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子检测技术领域，具体涉及一种专用于乳腺癌复发风险评估21基因的核酸序列的检测试剂盒。

背景技术

乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤，全球每年约有120万名妇女患乳腺癌，50万人死于乳腺癌。在我国乳腺癌的平均死亡率为2.61/10万，以沿海几个城市的死亡率显著偏高，城市的死亡率比农村高出1.4倍。我国近几年来其发病率呈逐年上升趋势，尽管临床研究已经取得了较大的进步，但是其复发及转移率仍然很高。近20年来，以手术为中心，化疗、放疗、内分泌治疗为辅助的多学科综合治疗模式得到长足的发展，使乳腺癌的复发和死亡率显著降低，但仍然缺乏有效的方法能够较为准确地预测患者的复发风险并给予相应的治疗。

21基因复发风险评估是一种根据21个基因联合检测，通过一定公式计算复发分数来判断乳腺癌复发风险的方法。其由16个癌症相关基因和5个参考基因组成。癌症相关基因大体分为5类，分别为增殖相关基因(Ki67、STK15、Survivin、CCNB1和MYBL2)、表皮生长因子受体相关基因(GRB7和HER2)、激素相关基因(ER、PgR、BCL2和SCUBE2)、浸润相关基因(MMP11和CTSL2)和3个未分类基因(GSTM1、CD68和BAG1)。5个参考基因分别为ACTB、GAPDH、RPLPO、GUS和TFRC。上述基因的选择是根据癌症相关文献、微阵列数据资料、基因组学数据库和分子生物学资料选定250个基因作为候选基因。根据3个独立的临床试验共447例患者的研究结果，选取与远处复发显著相关的基因，对250个候选基因进一步筛选，最终确定了上述16个癌症相关基因，并确定了5个管家基因作为参考基因。该项检测适用于淋巴结阴性、雌激素受体阳性且将来可能接受三苯氧胺治疗的临床I、Ⅱ期乳腺癌患者。通过分析21个基因的表达来确定RS分值(0～100分)，RS<18、18≤RS≤30、RS≥31分别为低、中、高危患者。2008年，《美国国立综合癌症网络(NCCN)乳腺癌临床实践指南》指出，对于ER阳性、HER2阴性、腋窝淋巴结阴性、肿瘤大小为0.6～1.0cm的中低分化或伴不良预后因素者，或肿瘤>1cm者，考虑应用RS对患者行进一步分析，对高危者予以术后辅助化疗(2B类)。

实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction简称Real Time PCR)是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术，在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过Ct值和标准曲线对样品中的DNA(或cDNA)进行定量检测的方法。该技术不仅实现了对DNA/RNA模板的定量，而且具有灵敏度和特异性高、能实现多重反应、自动化程度高、无污染、成本低廉等特点。目前已有多种运用定量PCR技术的试剂盒应用于临床疾病相关的病原体检测、基因分型、突变研究等。

本发明利用荧光定量的优点，具有操作简便、特异性强、敏感性高、成本低廉及高通量等优点，采用荧光定量聚合酶链式反应同时对乳腺癌复发风险评估的21基因进行扩增检测，从而考虑是否需要辅助化疗等临床治疗措施。

发明内容

本发明的目的是开发一种灵敏、准确、操作简便的新型检测试剂盒，实现乳腺癌复发风险评估的21基因快速检测，以弥补现有检测方法的不足。

一种乳腺癌复发风险评估21基因检测引物，包括SEQ ID NO.：1～42所示的核苷酸序列。

具体的引物扩增信息如下：

(1)扩增癌症相关基因Ki67基因的特异性引物，如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；

(2)扩增癌症相关基因STK15基因的特异性引物，如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；

(3)扩增癌症相关基因Survivin基因的特异性引物，如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示；

(4)扩增癌症相关基因CCNB1基因的特异性引物，如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示；

(5)扩增癌症相关基因MYBL2基因的特异性引物，如SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示；

(6)扩增癌症相关基因GRB7基因的特异性引物，如SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示；

(7)扩增癌症相关基因HER2基因的特异性引物，如SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示；