[发明专利]一种大鳍弹涂鱼DNA条形码标准检测序列及其应用

权利要求书

1.一种大鳍弹涂鱼DNA条形码标准检测序列，其特征在于，其序列如SEQ ID NO:1所示。

2.含有权利要求1所述大鳍弹涂鱼DNA条形码标准检测序列的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

3.用于鉴定大鳍弹涂鱼的引物组，其特征在于，它包括引物对一和引物对二，所述引物对一的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示；所述引物对二的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示。

4.一种用于鉴定大鳍弹涂鱼的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中含有如权利要求3所述的引物组。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒还可以包括PCR技术常用的试剂。

6.权利要求1所述的大鳍弹涂鱼DNA条形码标准检测序列、权利要求3所述的引物组或权利要求4或5所述的试剂盒在鉴定大鳍弹涂鱼中的应用。

7.一种大鳍弹涂鱼的分子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)从待鉴定组织样本中分离提取基因组DNA；

(2)以步骤(1)所得到的基因组DNA为模板，采用两对引物，通过聚合酶链式反应进行扩增；

其中，引物对一的正向引物序列和反向引物序列分别如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示；引物对二的正向引物序列和反向引物序列分别如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示；

(3)将步骤(2)所得聚合酶链式反应扩增产物用琼脂糖凝胶电泳进行分离，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性扩增出600±10bp的条带，则将其进行测序分析；

(4)根据测序结果，如果与如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列的同源性在98％以上，即可判断该待鉴定组织为大鳍弹涂鱼。

8.根据权利要求7所述的大鳍弹涂鱼分子鉴定方法，其特征在于，步骤(2)中所述聚合酶链式反应的条件为：95℃变性2min；94℃、30s，55℃、30s，72℃、1min，35个循环；72℃延伸10min。