[发明专利]一种提高发酵细胞中的代谢产物量及制备IDMS标准品的方法

权利要求书

1.一种制备用于同位素稀释质谱检测的具有¹³C标记的代谢物标准品的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)利用发酵培养基培养细胞，所述的发酵培养基中的碳源是¹³C标记葡萄糖；所述的细胞是酵母细胞；

(2)当发酵培养基中¹³C标记葡萄糖基本耗尽时，分3～4批瞬间地补加¹³C标记葡萄糖；首批次补加¹³C标记葡萄糖后溶氧下降，待溶氧回升时，进行后一批次补加¹³C标记葡萄糖；每次补加后3～10分钟取发酵液，制备IDMS标准品；每批补加¹³C标记葡萄糖的量为0.8～5g/L。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的细胞是毕赤酵母细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，¹³C标记葡萄糖基本耗尽时，分4批补加¹³C标记葡萄糖。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，每批补加¹³C标记的碳源的量为1.2～3g/L。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，每批补加¹³C标记葡萄糖的量为1.5～2g/L。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，每批补加¹³C标记葡萄糖的量为1.5g/L。

7.如权利要求1～6任一所述的方法，其特征在于，在每批补加¹³C标记葡萄糖后4～7分钟，取发酵液，制备IDMS标准品。

8.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的发酵培养基包括：碳源，钾离子，钙离子，镁离子，微量元素和磷酸根。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的发酵培养基包括：

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，制备IDMS标准品的方法包括：

(i)取发酵液至冷甲醇溶液中，均匀分装样液，离心并去除上清；

(ii)在(i)处理后的样品中加入乙醇溶液，混匀后升温至95±1℃处理2～10分钟，冷却，离心获取上清；

(iii)对(ii)获得的样品进行浓度调节、定容、分装，获得所述的具有¹³C标记的代谢物标准品。