[发明专利]一种山楂叶中黄酮单体的制备方法

说明书

本发明公开了一种山楂叶中黄酮单体的制备方法，其解决了现有技术中山楂叶中黄酮类单体制备效率低、成本高、制备量小的问题，具有操作简便，效率高，成本低，制备的黄酮单体纯度高的效果。其技术方案为：包括如下步骤：1)将山楂叶粉碎、提取、富集、蒸干，制得山楂叶总黄酮样品；2)应用高速逆流色谱法将样品中的槲皮素‑3‑O‑(2,6‑di‑α‑L‑吡喃鼠李糖基)‑β‑D‑半乳糖苷，4″‑O‑牡荆素葡糖苷、异槲皮苷和(2R,3R)‑3,5,7,3',5'‑五羟基黄烷进行分离纯化；溶剂系统为氯仿：甲醇：水：正丁醇＝3.5‑4.5:2.5‑3.5:1.5‑2.5:1‑2，v/v。

技术领域

本发明属于中药有效成分的高效制备技术领域，具体涉及一种山楂叶中黄酮单体的制备方法。

技术背景

山楂叶(Crataegi Folium)为蔷薇科(Rosaceae)植物山里红(Crataeguspinnatifida Bge.Var.major N.E.Br.)或山楂(Crataegus pinnatifida Bge.)的干燥叶，具有活血化瘀，理气通脉，化浊降脂等多种功效，在我国山东、陕西、山西等地均广泛分布。山楂叶作为山楂果实的副产物，资源丰富、产量高，具有广泛的开发价值。现代药理研究表明山楂叶具有降血脂、抗心肌缺血缺氧、防治糖尿病、抗炎和镇痛等多种药理活性。并且已广泛的应用于山玫胶囊、益心酮片等多味中药中。传统的山楂叶中黄酮类化合物的分离方法为聚酰胺色谱、硅胶柱色谱和Sephadex LH-20等制备方法，其局限性是费时费力、污染环境、样品纯度低，而且反复柱层析对样品有不可逆性吸附作用，分离得到黄酮类化合物单体制备效率低、成本较高，难以发展成为制备量大的分离技术。

高速逆流色谱(High-speed Counter-current Chromatography，HSCCC)是近30年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液-液分配色谱分离技术，它避免了固态支持体或载体带来的样品易被死吸附、损耗和变性等各种问题，使用其它液相色谱法进行制备型分离时，其分配效率会显著降低，溶剂消耗量大，HSCCC保证较高峰型分辨度，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和，节约溶剂。高速逆流色谱能直接进大量粗提样品或合成混合物，分离结果能达到相当高的纯度，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。但是溶剂系统的选择对于HSCCC分离效果十分关键，而到目前为止，溶剂系统的选择还没有充分的理论依据，而是根据操作人员积累的丰富经验来选择，如根据实际情况，总结分析并参照相关的专著及文献，从所需分离的物质的类别出发寻找相似的分离实例，选择极性适合的溶剂系统。如果遇到待分离纯化的物质种类较多时，而且没有与待分离的物质的极性相似的分离实例时，则难以确定溶剂系统，更无法对溶剂系统中的各种溶剂的比例进行调节，难以实现待分离物质的分离。

发明内容

针对上述现有技术中存在的技术问题，本发明提供了一种山楂叶中黄酮单体的制备方法，包括如下步骤：

1)将山楂叶粉碎、提取、富集、蒸干，制得山楂叶总黄酮样品；

2)应用高速逆流色谱法将样品中的槲皮素-3-O-(2,6-di-α-L-吡喃鼠李糖基)-β-D-半乳糖苷，4”-O-牡荆素葡糖苷、异槲皮苷和(2R,3R)-3,5,7,3',5'-五羟基黄烷进行分离纯化；

溶剂系统为氯仿：甲醇：水：正丁醇＝3.5-4.5:2.5-3.5:1.5-2.5:1-2(v/v)。

本发明中将提取得到的总黄酮样品经特定溶剂系统的高速逆流色谱分离纯化，得到纯度大于98％的槲皮素-3-O-(2,6-di-α-L-吡喃鼠李糖基)-β-D-半乳糖苷，4”-O-牡荆素葡糖苷、异槲皮苷和(2R,3R)-3,5,7,3',5'-五羟基黄烷。该方法成本低，操作简便，效率高，可以大批量分离制备高纯度山楂叶黄酮单体化合物。

进一步的，步骤1)中，所述提取是将一定质量的山楂叶粉末用7-9倍量的50-95％乙醇加热回流提取，得提取液。