[发明专利]一种基于熔解曲线法单管同时检测多种呼吸道病毒的引物及其应用

权利要求书

1.一种基于熔解曲线法单管同时检测多种呼吸道病毒的引物，其特征在于，包括SEQ ID NO.1～8所示的反转录引物、SEQ ID NO.9～26所示的扩增引物、SEQ ID NO：27～28所示的启动扩增的通用引物、SEQ ID NO.29～35所示的分子信标探针，所述每条分子信标探针的两端分别带有荧光基团和猝灭基团。

2.根据权利要求1所述的基于熔解曲线法单管同时检测多种呼吸道病毒的引物，其特征在于，所述的呼吸道病毒包括：甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒A型、呼吸道合胞病毒B型、鼻病毒、柯萨奇病毒B型、腺病毒。

3.根据权利要求1所述的基于熔解曲线法单管同时检测多种呼吸道病毒的引物，其特征在于，所述荧光基团为FAM、HEX或者Cy5，所述淬灭基团为DABCYL。

4.权利要求1～3任一所述基于熔解曲线法单管同时检测多种呼吸道病毒的引物在检测呼吸道病毒中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，通用引物在扩增体系中的终浓度为0.1uM；扩增引物上游引物浓度为0.02uM，扩增引物下游引物浓度为0.2uM；分子信标探针浓度为0.2uM。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，在PCR检测时，其具体程序如下：

热启动：95℃15min；

富集阶段：94℃30s，52℃1min，72℃1min 15个循环；

加尾扩增：94℃15s，70℃1.5min6个循环；

PCR扩增：94℃15s，52℃15s，72℃15s 55cycles个循环；

延伸阶段：72℃3min；

熔解分析：95℃1min，37℃5min，80℃～30℃0.1℃/s。