[发明专利]原代T细胞感染用重组逆转录病毒、感染方法及其应用

说明书

本发明提供一种原代T细胞感染用重组逆转录病毒、感染方法及其应用，所述逆转录病毒从5’端到3’端依次包括长链重复序列编码区、包装信号编码区、启动子编码区，puro基因编码区，其中所述包装信号编码区第786‑788位的核苷酸编码的序列为ATA；所述包装信号编码区第829‑831位的核苷酸编码的序列为GCC；所述启动子编码区第70‑72位的核苷酸编码的序列为TGC。采用本发明所述的原代T细胞感染方法，感染用重组逆转录病毒可以高效的感染人和鼠的原代T细胞，且感染效率高。

技术领域

本发明涉及一种原代T细胞感染用重组逆转录病毒、感染方法及其应用，尤其应用于转染T细胞。

背景技术

肿瘤免疫治疗(Cancer Immunotherapy)是目前治疗恶性肿瘤最有前景的手段之一。肿瘤免疫治疗是应用免疫学原理和方法，可通过提高肿瘤细胞的免疫原性和增强效应细胞杀伤的能力来激发和增强机体抗肿瘤免疫应答，也可通过免疫细胞和效应分子输注宿主体内，协同机体免疫系统杀伤肿瘤、抑制肿瘤生长。当前的嵌合抗原受体T细胞技术(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，CAR-T)以及T细胞受体(TCR)嵌合型T细胞(TCR-T)作为过继性细胞回输治疗(Adoptive cellular Therapy，ACT)技术两大最新的免疫细胞技术，被认为是肿瘤的过继性细胞免疫疗法(Adoptive CellarImmunotherapy，ACI)中最有前景的治疗方式之一。

T细胞过继性细胞回输治疗技术原理如下：识别黑色素瘤相关抗原的重组TCR和嵌合抗原受体(CAR)的基因序列被包装进病毒载体中，通过病毒感染可以实现TCR/CAR在T细胞上的表达，通过将基因工程编辑的T细胞(表达活性的TCR/CAR分子)扩增和回输进患者体内以达到治疗肿瘤的目的。CAR-T/TCR-T疗法要求对病人的效应T细胞在体外进行基因编辑和扩增，这些细胞将具有特异识别和杀伤肿瘤细胞的能力，通过T细胞回输实现治疗肿瘤的目的。如何实现T细胞CAR/TCR分子的高效表达是此过程十分关键的步骤之一，因而传递CAR/TCR基因载体的设计显得尤为重要。常用的载体有病毒载体和非病毒载体(Non-ViralVectors)，非病毒载体虽然较病毒载体在免疫原性等方面有优势，但是其不仅要克服细胞内及细胞外的屏障，还要克服许多来自提高转染效率的挑战，其次由于没有通用的传送手段，目前可行性非常低，而病毒载体在实现基因转导和表达的效率方面有着绝对的优势，也是目前基因治疗的主流载体。

T细胞由于其本身的生物特性使其进行病毒感染实现外源基因表达的效率非常低，基于不断研究，越来越多的研发工作需要对原代T细胞进行基因编辑，目前国际上也没有十分成熟的产品可以高效感染原代T细胞并保证操作简单，这严重限制和阻碍了相关研究工作的开展。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种原代T细胞感染方法、感染用重组逆转录病毒及其应用，用于解决现有技术中的不足。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种原代T细胞感染用重组逆转录病毒，所述逆转录病毒从5’端到3’端依次包括长链重复序列编码区、包装信号编码区、启动子编码区，puro基因编码区，其中所述包装信号编码区第786-788位的核苷酸编码的序列为ATA；所述包装信号编码区第829-831位的核苷酸编码的序列为GCC；所述启动子编码区第70-72位的核苷酸编码的序列为TGC。

优选地，所述启动子为MSCV。

优选地，启动子编码区和包装信号编码区之间还有增强子，所述增强子的序列为TTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCG。

优选地，所述原代T细胞感染用重组逆转录病毒是将HB-RV通过突变获得的。所述HB-RV为现有已知病毒。