[发明专利]原代T细胞感染用重组逆转录病毒、感染方法及其应用

权利要求书

1.一种原代T细胞感染用重组逆转录病毒，其特征在于，所述逆转录病毒载体的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的原代T细胞感染用重组逆转录病毒应用于非治疗性转染T细胞。

3.一种试剂盒，包括治疗有效量的如权利要求1所述的原代T细胞感染用重组逆转录病毒。

4.一种非治疗性原代T细胞感染方法，至少包括以下步骤：

a)将anti-CD3和anti-CD28的抗体用缓冲液稀释至5-10ug/ml，向表面未做处理的多孔板上每个培养孔加入抗体溶液，包被12-16h；

b)弃掉抗体包被液，用缓冲液封闭多孔板，封闭；

c)弃掉封闭液，烘干；

d)将原代T细胞加到上述包被好的培养孔中，放入CO₂培养箱进行活化；

e)观察活化细胞体积增大后，保留20~30%体积的培养基，其余培养基用移除，并将剩余的细胞吹散重悬，计数，每个培养孔加入30ul如权利要求1所述的原代T细胞感染用重组逆转录病毒，病毒滴度为1*10⁸ TU/ml，加入病毒后吹打混匀将平板于室温，进行离心。

5.根据权利要求4所述的非治疗性原代T细胞的感染方法，其特征在于，所述步骤a)中缓冲液选自pH 7.4磷酸缓冲盐溶液。

6.根据权利要求4所述的非治疗性原代T细胞的感染方法，其特征在于，所述步骤a)中缓冲液选自1% BSA的磷酸缓冲盐溶液，封闭时间是0.5~1h。

7.根据权利要求4所述的非治疗性原代T细胞的感染方法，其特征在于，

所述步骤c）中烘干的条件是37℃烘干2~4h。