[发明专利]一种制备利那洛肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药合成技术领域，具体涉及一种制备利那洛肽的方法。

背景技术

利那洛肽(Linaclotide)是一种口服的选择性鸟苷酸环化酶C受体激动剂，主要作用于肠道，可诱导肠液分泌，用于治疗以便秘为主的肠应激综合症及长期便秘。其商品名为Linzess，由美国Ironwood Pharma公司研发，2012年8月获美国FDA批准上市。利那洛肽是鸟苷酸环化酶C(GC-C)激动剂的胶囊制剂，每日口服一次。血浆浓度检测不到的利那洛肽与肠道GC-C结合后，导致细胞内和细胞外环鸟苷酸(cGMP)浓度升高。细胞内cGMP升高可以刺激肠液分泌，加快胃肠道移行，从而增加排便频率。细胞外cGMP浓度升高可以降低痛觉神经的灵敏度，而根据动物模型研究显示，这可减低肠道疼痛。利那洛肽是首个具有此种作用机制的便秘治疗药物。

利那洛肽是一个14-氨基酸多肽，含有三个二硫键，其序列结构如下：

结构式(氨基酸序列)

利那洛肽中三个二硫键的成环反应是本产品合成的难点。

现有文献报道的合成路线主要有三种：

方法一：随机氧化(random oxidation)法

通过常规固相多肽合成方法在树脂上合成线性肽，酸解脱除保护基和树脂载体得到利那洛肽线性粗肽，然后在液相缓冲溶液中，采用随机氧化(random oxidation)的方法一步形成三对二硫键(见反应示意图)。如专利CN201310556661.8、CN201510314459.3、CN201610739783.4、CN201610644791.0、CN201610328263.4、CN201210375246.8、CN201310223243.7、WO2014188011A2、WO2016038497A1等。

固相偶联-随机氧化反应示意图如图5所示。

方法一中,合成只使用了一种Cys的保护基团，最后只需一步随机氧化成环得到目标产物，操作简单。但是，对于需要定位形成三对二硫键的肽来说，随机氧化会得到许多二硫键错配的异构体，尽管可以通过一些缓冲溶液体系来使得氧化过程中尽可能大的转变为目标分子，但是始终无法避免其他错配异构体的产生。这种操作容易使得目标肽粗肽纯化困难，不利于产品质量的控制。同时，采用该方法进行氧化，需要在高度稀释的溶液中，对外界条件比如温度等的依赖性也非常高，在不同的环境下，自然氧化所得到的产品收率相差也非常大，很难进行大规模生产。

方法二：分步氧化法(Step Oxidation)

使用三对带有不同侧链保护基的Cys，通过固相合成在树脂上合成线性肽，然后采用分步脱除氧化的方法形成三对二硫键。如专利CN201510391880.4，采用了Trt、Acm、tBu三对不同的保护基。

固相偶联-分步氧化反应示意图如图6所示。

专利CN201310617050.X采用了Trt、Acm、Hmq三对不同的保护基。

分步氧化法，半胱氨酸采用三对不同的保护基，合成成本高；碘为强氧化剂，会破坏前面形成的两对二硫键，形成错配产物；使用不同侧链保护基的半胱氨酸，生产成本高；分步氧化操作繁复，收率极低。

方法三：通过固液结合、片段缩合，合成线性肽，然后通过随机氧化或分步氧化合成利那洛肽。如专利CN201510467488.3、CN201410357720.3、WO2015022575A2、WO2012118972A2。

这种方法操作繁复，效率低，成本高。

综上，随机氧化法错配几率高，杂质多且不易控制，氧化须在稀溶液中，尽量采用温和的氧化体系，环化时间长，生产效率低；分步氧化法，半胱氨酸需要三对不同的保护基，合成操作步骤繁复，产率低，成本高。随机氧化的氧化产物粗品纯度一般在30～40％左右。分步氧化法制备，若每一步都用纯品做，最后所得产物纯度也仅可达到50～60％，同时其步骤繁琐。

因而需要寻找一条更为简单、高效的合成路线，本发明方法较好地解决了这一问题，适合工业化生产。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有的技术空白，提出了本发明。