[发明专利]一种多效唑半抗原及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种多效唑半抗原，其特征在于，其分子结构式如(1)所示：

2.一种如权利要求1所述的多效唑半抗原的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，取1,2,4-三氮唑，加无水碳酸钾、乙醇，60℃反应完全，纯化，得到3,3-二甲基-1-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-2-丁酮，其分子结构式如式(2)所示，其中1,2,4-三氮唑和无水碳酸钾的用量比为：8.4g︰15-20g；

步骤2，取3,3-二甲基-1-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-2-丁酮溶于无水DMF中，取NaH溶于无水DMF中，将3,3-二甲基-1-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-2-丁酮的DMF溶液逐滴加入到NaH的DMF溶液中，反应完全冷却后，加4-硝基氯化苄溶于无水DMF溶液，并逐滴将4-硝基氯化苄的DMF溶液滴加到反应液中，反应完全，纯化，得产物4,4-二甲基-1-(4’-硝基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊酮，其分子结构式如式(3)所示，其中3,3-二甲基-1-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-2-丁酮、NaH、4-硝基氯化苄的用量比为：3.38g︰0.4-0.6g︰3-4g；

步骤3，取产物4,4-二甲基-1-(4’-硝基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊酮和NaBH₄溶于甲醇中，室温反应完全，纯化，得产物4,4-二甲基-1-(4’-硝基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊醇，其分子结构式如式(4)所示，其中4,4-二甲基-1-(4’-硝基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊酮和NaBH₄的用量比为：0.923g︰0.16-0.2g；

步骤4，取4,4-二甲基-1-(4’-硝基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊醇，加最小量乙酸至完全溶解，然后分批慢慢加入4-6个当量的Fe粉，约0.8-1.5h加完，反应完全，纯化，得产物4,4-二甲基-1-(4’-氨基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊醇，其分子结构式如式(5)所示；

步骤5，取4,4-二甲基-1-(4’-氨基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊醇，加CH₂CH₂、丁二酸酐、三乙胺，室温搅拌反应完全，纯化，得到权利要求1所述的多效唑半抗原，其中4,4-二甲基-1-(4’-氨基苯基)-2-(1’,2’,4’-三氮唑-1-基)-3-戊醇、CH₂CH₂、丁二酸酐、三乙胺的用量比为：1.2mmol︰4-6ml︰2.5-3.5mmol︰1.5-2.5mmol。

3.一种多效唑抗原，由本发明第一个方面所述的多效唑半抗原与载体蛋白偶联得到，其分子结构式如式(6)所示：

。

4.一种制备如权利3所述的多效唑抗原的方法，包括以下步骤：

步骤a，取权利要求1所述的多效唑半抗原，加入无水二甲基甲酰胺混匀后，加入二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，室温反应过夜，其中，多效唑半抗原、二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的用量比为：0.09mmol︰0.08-0.12mmol︰0.08-0.12mmol；

步骤b，离心，取溶液，将溶液缓慢加入载体蛋白溶液中，所用载体蛋白的量按照半抗原与载体蛋白的摩尔比15-60︰1计；

步骤c，反应完全后，透析，得到多效唑抗原。

5.一种多效唑抗体，由权利要求3所述的多效唑抗原免疫动物制备得到。

6.由权利要求5所述的多效唑抗体制备的多效唑酶联免疫试剂盒。

7.权利要求1所述的多效唑半抗原或权利要求3所述的多效唑抗原在制备多效唑抗体中的应用。

8.权利要求5所述的多效唑抗体或权利要求6所述的多效唑酶联免疫试剂盒在检测土壤水体和水果食品中多效唑残留的应用。