[发明专利]一种促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生长萌发的方法

说明书

本发明公开了一种促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生长和萌发的方法，将促进嗜热脂肪芽孢杆菌的菌种在活化培养基上进行划线培养得到活化的菌种；将活化的菌种在产孢培养基上进行划线培养或者涂布培养得到嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢；将得到的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢用灭菌生理盐水制成芽孢复溶液，然后向1ml检测培养基中添加10‑20μL芽孢复溶液混匀得混合菌液；混合菌液加入到无菌微孔板微孔中，向其中加入100μL纯牛奶即可检测。本发明利用嗜热脂肪芽孢杆菌检测牛奶中抗生素的残留，提供一种促进芽孢的生长和芽孢萌发的方法，大大降低了生产成本，缩短了检测时间，可提高产品的竞争力。

技术领域

本发明涉及芽孢诱导和微生物检测领域，具体涉及一种促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生长和萌发的方法。

背景技术

嗜热脂肪芽孢杆菌属于嗜热性需氧兼厌氧芽孢杆菌，利用葡萄糖产酸不产气。其最适生长繁殖温度为56～65℃，最高生长温度为65～75℃，属于嗜热菌。当营养细胞受到营养缺乏、代谢产物积累或温度变化等因素影响时，产生具有休眠特性且无毒、无热源、无致病性的芽孢。芽孢对辐射、热、干燥、极端pH和一些有毒化学物品等有很强的抵抗能力。该菌在微生物检测领域有一个重要的用途，就是用来检测牛奶中抗生素的残留，国际乳品联合会推荐的微生物检测抗生素菌种为嗜热脂肪芽孢杆菌。

目前牛奶中抗生素的检测方法中，微生物检测法以其操作简便，经济实惠的特点被国内外广泛采用。其基本原理是将芽孢及其生长必须的营养物质和产酸指示剂(溴甲酚紫)固定在微孔板内，通过添加牛奶待测样品后，在一定温度培养一定时间，若芽孢正常萌发会产酸，使指示剂由紫色变成黄色，说明微孔板中的芽孢正常萌发，牛奶中不含有抗生素；若牛奶中含有抗生素，会抑制芽孢的萌发，指示剂不变色(保持紫色)。目前国际上最完善的产品是戴尔沃公司生产的检测体系，其产品检测所需时间为2.5-3小时，国内的产品检测时间通常为3小时或更长，如果能够缩短检出时间，提高检测效率，会大大提高产品的竞争力。

芽孢对外界环境极为敏感，一旦其探测到外部存在适宜萌发的条件，芽孢就开始萌发，迅速生长恢复到营养细胞状态。本发明利用嗜热脂肪芽孢杆菌作为牛奶抗生素检测的敏感菌株，发明了一种促进芽孢生长及芽孢萌发的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足，提供一种促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生长的方法，并将该芽孢应用到牛奶抗生素残留检测过程，大大降低了生产成本。，同时提供一种促进芽孢萌发的方法，从而缩短牛奶抗生素的检测时间，提高产品的竞争力。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生长的方法，包括以下步骤：

(1)菌种活化：将促进嗜热脂肪芽孢杆菌的菌种在活化培养基上进行划线培养得到活化的菌种；

所述的划线培养的培养温度为55-65℃；

所述的划线培养的培养时间为12-24h；

所述的活化培养基由以下重量百分比的原料组成：蛋白胨1％，牛肉膏0.3％，氯化钠0.5％，琼脂2％，蒸馏水补足至100％，调其pH为7.2±0.2后在121℃下灭菌20-30min后冷却至室温待用。

(2)产孢培养：将步骤(1)得到的活化的菌种在产孢培养基上进行划线培养或者涂布培养得到嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢；

所述的划线培养或者涂布培养的培养温度为55-65℃；

所述的划线培养或者涂布培养的培养时间为24-30h；

所述的产孢培养基由以下重量百分比的原料组成：胰蛋白胨1.7％，植物蛋白胨0.3％，氯化钠0.5％，磷酸氢二钾0.25％，琼脂2％、吐温-80 0.5-1％，蒸馏水补足至100％，调其pH为7.3±0.2后在121℃下灭菌20-30min后冷却至室温待用；