[发明专利]一种促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生长萌发的方法

权利要求书

1.一种促进嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢生长的方法，其特征在于，步骤为：

(1)菌种活化：将嗜热脂肪芽孢杆菌的菌种在活化培养基上进行划线培养得到活化的菌种；

所述的划线培养的培养温度为55-65℃；

所述的划线培养的培养时间为12-24h；

所述的活化培养基由以下重量百分比的原料组成：蛋白胨1％，牛肉膏0.3％，氯化钠0.5％，琼脂2％，蒸馏水补足至100％，调其pH为7.2±0.2后在121℃下灭菌20-30min后冷却至室温待用；

(2)产孢培养：将步骤(1)得到的活化的菌种在产孢培养基上进行划线培养或者涂布培养得到嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢；

所述的划线培养或者涂布培养的培养温度为55-65℃；

所述的划线培养或者涂布培养的培养时间为24-30h；

所述的产孢培养基由以下重量百分比的原料组成：胰蛋白胨1.7％，植物蛋白胨0.3％，氯化钠0.5％，磷酸氢二钾0.25％，琼脂2％、吐温-80 0.5-1％，蒸馏水补足至100％，调其pH为7.3±0.2后在121℃下灭菌20-30min后冷却至室温待用；

当培养方式为涂布培养时，需要将步骤(1)得到的活化的菌种接种到无菌生理盐水中制成菌悬液，然后再将菌悬液涂布到产孢培养基上。

2.一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢在检测牛奶中抗生素的残留中的应用，所述的应用包括以下步骤：

1)制备芽孢复溶液：将权利要求1的步骤(2)得到的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢用灭菌生理盐水按照质量比1:10-1:20比例刮下，在100℃煮沸30min后在5000rpm下离心5min，收集菌体再用灭菌生理盐水按照质量比1:10-1:20比例复溶，混匀后得到芽孢复溶液备用；

2)制作试剂盒微孔板：在无菌操作台中，向1ml检测培养基中添加10-20μL步骤1)得到的芽孢复溶液，充分混匀得混合菌液；取100-130μL混合菌液加入到无菌微孔板微孔中，待凝固后封口，冰箱保存；

3)抗生素检测：向步骤2)制备好的微孔板微孔中加入100μL纯牛奶，同时向另外的微孔中加入终浓度为1ppb的青霉素牛奶混合物作为阳性对照，将微孔板放入60-65℃恒温培养，记录试剂盒微孔板变色时间；

所述的步骤2)中的检测培养基由以下重量百分比的原料组成：蛋白胨0.5％，葡萄糖0.5％，溴甲酚紫0.004％，琼脂0.5％，0.2-0.5％红糖，蒸馏水补足至100％；调其pH为7-8.5后在115℃下灭菌20-30min后冷却至室温待用。

3.一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢在检测牛奶中抗生素的残留中的应用，所述的应用包括以下步骤：

1)制备芽孢复溶液：将权利要求1的步骤(2)得到的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢用灭菌生理盐水按照质量比1:10-1:20比例刮下，在100℃煮沸30min后在5000rpm下离心5min，收集菌体再用灭菌生理盐水按照质量比1:10-1:20比例复溶，混匀后得到芽孢复溶液备用；

2)制作试剂盒微孔板：在无菌操作台中，向1ml检测培养基中添加10-20μL步骤1)得到的芽孢复溶液，充分混匀得混合菌液；取100-130μL混合菌液加入到无菌微孔板微孔中，待凝固后封口，冰箱保存；

3)抗生素检测：向步骤2)制备好的微孔板微孔中加入100μL纯牛奶，同时向另外的微孔中加入终浓度为1ppb的青霉素牛奶混合物作为阳性对照，将微孔板放入60-65℃恒温培养，记录试剂盒微孔板变色时间；

步骤2)中，所述的检测培养基由以下重量百分比的原料组成：蛋白胨0.5％，葡萄糖0.5％，溴甲酚紫0.004％，琼脂0.5％，0.2-0.5％红糖，0.1-0.5％吐温-80，蒸馏水补足至100％；调其pH为7-8.5后在115℃下灭菌20-30min后冷却至室温待用。

4.一种嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢在检测牛奶中抗生素的残留中的应用，所述的应用包括以下步骤：

1)制备芽孢复溶液：将权利要求1的步骤(2)得到的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢用灭菌生理盐水按照质量比1:10-1:20比例刮下，在100℃煮沸30min后在5000rpm下离心5min，收集菌体再用灭菌生理盐水按照质量比1:10-1:20比例复溶，混匀后得到芽孢复溶液备用；

2)制作试剂盒微孔板：在无菌操作台中，向1ml检测培养基中添加10-20μL步骤1)得到的芽孢复溶液，充分混匀得混合菌液；取100-130μL混合菌液加入到无菌微孔板微孔中，待凝固后封口，冰箱保存；

3)抗生素检测：向步骤2)制备好的微孔板微孔中加入100μL纯牛奶，同时向另外的微孔中加入终浓度为1ppb的青霉素牛奶混合物作为阳性对照，将微孔板放入60-65℃恒温培养，记录试剂盒微孔板变色时间；

步骤2)中，所述的检测培养基由以下重量百分比的原料组成：蛋白胨0.5％，葡萄糖0.5％，溴甲酚紫0.004％，琼脂0.5％，0.2-0.5％红糖，0.1-0.5％吐温-80，0.1-0.5％KCl，0.1-0.5％天冬氨酸，蒸馏水补足至100％；调其pH为7-8.5后在115℃下灭菌20-30min后冷却至室温待用。