[发明专利]一种复合疫苗佐剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学技术领域，具体涉及一种复合疫苗佐剂及其在免疫治疗及预防领域的用途。

背景技术

佐剂是非特异性的免疫调节剂，在疫苗中添加佐剂，可起到提高免疫反应强度、改变免疫反应类型、延长免疫反应持续时间等多种作用。特别是对免疫原性较弱的疫苗(如灭活疫苗、亚单位疫苗、重组蛋白疫苗、多肽疫苗等)，合理的应用佐剂可提高疫苗在不同免疫背景人群中接种的阳转率。此外，添加佐剂还可降低疫苗中抗原的用量，减少疫苗针次，有助于降低疫苗成本及解决疫情爆发时的产能问题。

早期的佐剂研究主要基于经验，由于缺乏技术及免疫机制研究的支持，佐剂的研发相对滞后于疫苗研发。自铝佐剂首次应用于人体，有近70年的时间，它是唯一的人用佐剂(O'Hagan DT等人.Expert Rev Vaccines 2013 Jan；12(1):13-30)。虽然铝佐剂成本低、安全性好，但该类佐剂主要活化Th2类免疫反应，对细胞免疫没有强化作用，且在许多人用疫苗(尤其是重组蛋白疫苗和多肽疫苗)中没有明显的强化免疫反应的效果。因此，随着越来越多候选疫苗的涌现及疫苗经济效益的凸显，对临床上可用的新型佐剂的需求正在快速增长。

乳剂型佐剂(包括水包油乳剂、油包水乳剂等)是新型佐剂的一个重要分支，动物实验显示，乳剂可联合多种弱抗原使用(重组蛋白、多肽等)，并诱发高滴度的抗原特异性抗体。油相成分、水相成分及乳化剂是乳剂的三大要素，这三个要素的选择和配比决定了乳剂的安全性、稳定性及免疫刺激活性。油包水乳剂以油相成分为主，乳化后黏度大，在体内扩散较慢，对抗原的缓释作用强，但局部刺激性和副反应较大，因此限制了其在人体的应用。而水包油乳剂以水相成分为主，人体耐受性较高，且与多数疫苗抗原的相容性较好。由于矿物油等不可代谢的油类成分可造成局部机体损伤，引起注射部位的毒副反应，因此人用佐剂研发时通常选择可代谢的植物油、动物油等(如花生油、角鲨烯等)。乳剂中常用的乳化剂多为安全性好的非离子型乳化剂。乳化剂的选择通常依据其亲水亲油平衡值(HLB值)，一般而言，HLB值越低表示乳化剂亲水性越弱，亲油性越强，倾向于形成W/O型乳状液；反之，HLB值越高，说明乳化剂的亲水性越强，亲油性越弱，倾向于形成O/W型乳状液。值得注意的是，HLB值只能确定所形成的乳状液类型，但由于乳化剂结构、分子大小和用量等其他参数的差异，相同HLB值的乳化剂乳化性能也不尽相同。研究发现，不同HLB值的乳化剂混合使用可以形成稳定的界面，防止颗粒凝集(Boyd J等人.J Colloid Interafee Sci,1972,41:359-370)，因此，疫苗佐剂中常使用两种及以上的乳化剂进行配比。不同的油相成分、水相成分及乳化剂混合后，各种成分的相互作用方式复杂多样，因此，采用不同配方制备的乳剂，其佐剂活性是难以预测的。

目前已获批上市的水包油乳剂佐剂有3种，分别是MF59、AS03及AF03，包含的油相成分均为角鲨烯。其中，MF59获批最早、应用范围最广。MF59的乳化剂为Tween-80及Span-85，均为人体可降解的表面活性剂，与角鲨烯及缓冲液混合，充分乳化后形成的水包油乳液中包含直径约160nm的液滴(O'Hagan DT等人.Expert Rev Vaccines 2013 Jan；12(1):13-30)。以MF59为佐剂的流感疫苗于1997年在意大利首次获批上市，目前该疫苗已在至少29个国家注册，累计销售量超过6000万剂。在2009年H1N1大规模流行期间，含MF59佐剂的两种H1N1疫苗(和)也获批应用于6个月以上的人群(包括孕妇)，其累计销量超过了1亿剂。此外，MF59还在临床试验中用于HIV、CMV、HBV、HCV、HSV等多种病毒疫苗，并显示出了良好的安全性。研究显示，MF59不能直接活化DC，但可刺激巨噬细胞、粒细胞、单核细胞分泌细胞因子，促进单核细胞分化成DC，并通过促吞噬作用促进APC对抗原的摄取；此外，MF59还可刺激免疫部位的肌细胞，改变其基因表达谱，活化免疫相关基因(Calabro S等人.Vaccine 2013 Jul 18；31(33):3363-9)。MF59不能活化TLR及Nlrp3炎性小体，目前尚未发现其直接作用的受体，但已明确其佐剂活性的发挥是MyD88依赖的(Seubert A等人.Proc Natl Acad Sci USA 2011 Jul 5；108(27):11169-74)。