[发明专利]一种治疗酒精性肝病的靶向性补体抗体微囊制剂及其制备方法与应用

说明书

本发明公开的一种治疗酒精性肝病的靶向性补体抗体胶囊制剂及其制备方法与应用，其制备方法是将含有补体抗体蛋白基因克隆到能够在中国仓鼠细胞（CHO,Chinese Hamster Ovary Cell）中高表达目的蛋白的表达载体pEE14.1中，然后转染至CHO细胞中，经传代培养、筛选出高产量的补体抗体蛋白表达细胞系，经细胞旋转培养技术扩大生产纯化，得到补体抗体蛋白CR2‑Crry，再将补体抗体蛋白制成补体抗体脂质体微囊，最后经膜过滤、除菌、分装，即为可治疗酒精性肝病的靶向性补体抗体胶囊制剂，供酒精性肝病患者服用，补体抗体微囊的剂量为：2.0g补体抗体/日，分两次使用。本发明具有靶向性强、高效、安全、不影响宿主全身免疫功能等优点。

技术领域

本发明涉及治疗酒精性肝病新药的开发，特别是一种治疗酒精性肝病的靶向性补体抗体微囊制剂及其制备方法与应用。

背景技术

酒精性肝病（ Alcohol-induced liver disease ，ALD）是由于长期大量饮酒所导致的肝脏疾病，包括脂肪肝、酒精性肝炎、肝纤维化和肝硬化等。酒精中毒是仅次于肝炎病毒导致肝损害的第二大病因。近年来ALD在中国的发病率呈上升趋势，已成为严重威胁人类健康的多发病和常见病。乙醇80%～90%在肝脏代谢，经过乙醇脱氢酶的催化，氧化为乙醛，再经乙醛脱氢酶催化转成乙酸，最终形成二氧化碳。在乙醇氧化过程中脱下大量的氢离子与辅酶Ⅰ（Nicotinamide Adenine Dinucleotide，NAD）结合，NAD被还原成为还原型辅酶Ⅰ（NADH），即NAD⁺ + H⁺ + 2e^- = NADH，使NADH/NAD上升，从而使细胞的氧化、还原反应发生变化，造成依赖于NADH/NAD的物质代谢发生障碍，而成为代谢紊乱和致病的基础。一方面乙醇促进体内活性氧簇（reactive oxygen species, ROS）与活性氮自由基（reactivenitrogen species，RNS）产生过多，超出机体抗氧化物的清除能力，另一方面受多因素影响体内还原型谷胱甘肽（Glutathione , GSH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase ,SOD）等抗氧化成分减少, 最终导致氧化与抗氧化系统的动态平衡失衡，从而促发氧化应激。该过程生成的自由基可引起生物膜脂质过氧化、细胞内蛋白酶变性、DNA氧化修饰等一系列毒性作用，最终导致肝细胞坏死或凋亡。氧化应激产生的自由基可使线粒体膜通透性增加，使线粒体DNA、GSH、氧化磷酸化蛋白及脂质等成分改变，最终引起细胞能量代谢障碍，导致细胞死亡。此外，乙醛在生理状态下能与多种蛋白发生共价结合，并主要在中央静脉周围的肝细胞中形成稳定的和不稳定的乙醛蛋白加合物（acetaldehyde protein adducts,APA），造成损伤性效应:①APA形成导致蛋白质结构改变和功能异常，如蛋白酶失活、DNA修复蛋白功能障碍、GSH耗竭、线粒体损伤、氧利用障碍等，从而导致肝细胞脂肪变、肝脏纤维化等病理变化。②APA可作为抗原诱导免疫反应，产生相应抗体，引起肝细胞炎症、坏死及纤维组织增生等病理变化。对酒精性肝病的治疗目前尚无特效药，维生素，还原型的谷胱甘肽等药物对于预防酒精性肝病及延缓病程有一定作用。

近年来证明有免疫炎症因素参与ALD的发病机制且越来越受到重视，其中补体成分发挥重要作用。

补体是存在于人和脊椎动物血清及组织液中的一组30多种具有酶样活性的球蛋白，补体固有成分加上其相关受体和调节因子共同组成补体系统，参与炎症及免疫调节等效应，具有重要的病理生理功能。补体系统的激活与调控是一个复杂的过程，其激活、生物学活性与补体抑制剂的调控位点简单概括如图1。其中C5b与补体途径终末部分（C6、C7、C8和C9）结合，形成膜攻击复合物(membrane attack complex, MAC)。MAC既能直接导致细胞溶解，又能刺激细胞释放炎性细胞因子。

补体的激活、效应与调控简介，见图1。