[发明专利]一种治疗酒精性肝病的靶向性补体抗体微囊制剂及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种治疗酒精性肝病的靶向性补体抗体微囊制剂，其特征是：将含有补体抗体蛋白基因克隆到能够在中国仓鼠卵巢细胞CHO中高表达目的蛋白的表达载体pEE14.1中，然后转染至CHO细胞中，经传代培养、筛选出高产量的补体抗体蛋白表达细胞系，经细胞旋转培养技术扩大生产纯化，得到补体抗体蛋白CR2-Crry，再将补体抗体蛋白制成补体抗体微囊，最后经膜过滤、除菌、分装，即为可治疗酒精性肝病的靶向性补体抗体微囊制剂。

2.一种治疗酒精性肝病的靶向性补体抗体制剂的制备方法，其特征是：包括如下步骤：

（1）补体抗体蛋白基因的表达载体pEE14.1构建：将补体抗体蛋白基因序列克隆扩张后通过HindIII和EcoRI这两个核酸内切酶插入到表达载体pEE14.1中，经测序验证后抽提纯化，备用；

（2）高产量的补体抗体蛋白表达细胞系构建：将上一步骤中构建好的补体抗体蛋白基因的表达载体转染至CHO细胞中，经过细胞传代培养、筛选后鉴定补体抗体蛋白的表达量，挑选产量比较高的细胞系用液氮冷冻保存，备用；

（3）补体抗体蛋白扩大生产、纯化及鉴定：将步骤2中构建的细胞系复苏培养，优化培养条件后转入工业化旋转培养罐扩大生产，然后将含有补体抗体蛋白的培养液经CR2特异性免疫球蛋白G纯化柱纯化，洗脱后浓缩鉴定，得到补体抗体蛋白原药CR2-Crry，备用；

（4）制备补体抗体微囊：采用单凝聚法制备微囊。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是：步骤（4）所述补体抗体微囊的制备是：称取100 mg的补体抗体蛋白原药与18 mg/mL浓度的海藻酸钠溶液20 mL混合均质，用容器抽取，逐滴滴入40 mL含有37 mg/mL的CaCl2溶液的烧杯中，20分钟后抽滤，洗涤，冷冻干燥后得到补体抗体微囊。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征是：步骤（4）所述补体抗体微囊的最大微囊包封率达到70%。

5.一种靶向性补体抗体微囊在制备治疗酒精性肝病药物中的应用，其特征是：将液体状补体抗体CR2-Crry微囊过滤除菌，无菌水配成1.0g补体抗体/10ml浓度，加入0.25%的氯甲酚防腐剂，手工或机械灌装，封盖，4℃储存。