[发明专利]一种促进瓜蒌组培育苗分化的方法

说明书

技术领域

本发明主要涉及种植技术领域，尤其涉及一种促进瓜蒌组培育苗分化的方法。

背景技术

瓜蒌，又名栝楼、药瓜等，为多年生草质滕本全株供药用的葫芦科栝楼属植物，果壳中药名瓜蒌，种子中药名瓜蒌仁，根中药名天花粉。全瓜蒌入药能清热散结，润肺化痰，养胃生津等，天花粉针剂临床上用于妇女中期妊娠、死胎、流产，并对癌细胞滋生有明显的抑制作用。

目前瓜蒌的种植方法多采用种子繁殖和分根繁殖，种子繁殖需要的时间较长，而且雌雄株比例严重不协调，分根繁殖发芽较慢，而且需要将块根挖出，浪费了大量的天花粉，目前瓜蒌的组织培养快繁技术才开始起步，诱导分化阶段需要25~30天才能出现诱导的细胞突起，需要的时间较长，因此，需要一种促进瓜蒌组培育苗分化的方法。

发明内容

为了弥补已有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种促进瓜蒌组培育苗分化的方法。

一种促进瓜蒌组培育苗分化的方法，包括以下步骤：

（1）外植体选取和处理：选择生长旺盛、结果较多、抗逆性强的优良植株，从叶柄处剪取嫩叶，不会对瓜蒌植株造成伤害，不影响瓜蒌的生长和结果，而且嫩叶来源广泛，任何时期均可以进行组织培养，种植效率明显提高，直接置于4~6℃、质量浓度为2.1~2.3%的食盐水中进行浸泡25~30分钟，取出后再置于22~24℃、体积分数为3~4%的醋酸溶液中浸泡40~45分钟，流水冲洗20分钟后置于营养液中浸泡2~3小时，再用无菌水冲洗冲洗3~4次，营养均衡，促进吸收，抑制病原微生物繁殖，可以避免使用过多的消毒液反复进行浸泡消毒，简化操作过程，节约成本，而且可以使外植体在微酸的环境中继续吸收和积累营养，加快成活和外植体诱导分化的过程，在超净工作台上斜剪叶柄底端少许，得外植体；

（2）培养基的配制：配制B5培养基为基础培养基，再加入辅料，加热搅拌至完全溶解，调节pH为5.8~6.0，分装于培养瓶内，于121℃灭菌20分钟，得培养基；

（3）外植体接种：在超净工作台上，将外植体伤口处斜面朝下，斜插于培养基上，外植体与培养基的夹角为45~55°，每瓶接种一个外植体，接种后在接种处滴加1滴米糠提取物，能够使伤口充分接触营养成分，富含矿物成分，促进营养成分的吸收，加快伤口愈合，增加米糠的利用途径，变废为宝，节约种植成本，得接种培养瓶；

（4）诱导分化培养：将接种培养瓶置于培养室内，1~6天，温度为22~23℃、湿度为86~88%、间歇光照为1600~1800lx、光照8小时、黑暗4小时，增强外植体的环境适应能力和抗逆性，适合突然较浓的营养成分，间歇式光照能够加快光合作用，促进外植体内营养成分的积累和愈伤组织形成及分化，7~25天，温度为26~27℃、湿度为91~92%、间歇光照为2100~2300lx、光照9小时、黑暗3小时，能够加快对营养成分的吸收，促进伤口的愈合和分化，缩短培养时间，增强抗逆性，提高后期的炼苗成活率，明显节约种植成本，得诱导分化苗。

所述步骤（1）的营养液，由以下重量份的原料制成：银耳提取物1.3~1.5、花生衣提取物1.1~1.3、芸苔素内酯0.13~0.15、发酵淘米水900~1000；所述的银耳提取物，含量为30%。

所述的花生衣提取物，是将花生衣洗净，粉碎，加入花生衣重量50~55倍量的体积分数为76~78%的酒精溶液，于56~58℃、32~34kHz超声30~35分钟，过滤，重复超声3次，每次超声减少5分钟，合并所有滤液，烘干至含水量6~8%，得花生衣提取物。

所述的发酵淘米水，将第1~2次淘米时的水混合，向淘米水中加入混合菌，混合均匀，发酵4~5天，得发酵淘米水。

所述的混合菌，由以下重量份的原料组成：啤酒酵母22~24、醋酸菌16~18、嗜热链球菌16~18、德氏乳杆菌11~13。

所述步骤（2）的辅料，由以下质量浓度的原料组成：白砂糖21~23g/L、琼脂6.2~6.4g/L、复硝酚钠0.5~0.7g/L、氨茶碱0.24~0.26mg/L、缩节胺0.13~0.15mg/L，在提供基础营养的同时，氨茶碱和缩节胺能够保持外植体的细胞活性，加快营养的吸收，增加氨茶碱和缩节胺的新的应用方法，促进外植体愈伤组织形成，加快诱导和分化，增强抗逆性。