[发明专利]一种促进瓜蒌组培育苗分化的方法

权利要求书

1.一种促进瓜蒌组培育苗分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体选取和处理：选择生长旺盛、结果较多、抗逆性强的优良植株，从叶柄处剪取嫩叶，直接置于4~6℃、质量浓度为2.1~2.3%的食盐水中进行浸泡25~30分钟，取出后再置于22~24℃、体积分数为3~4%的醋酸溶液中浸泡40~45分钟，流水冲洗20分钟后置于营养液中浸泡2~3小时，再用无菌水冲洗冲洗3~4次，在超净工作台上斜剪叶柄底端少许，得外植体；

（2）培养基的配制：配制B5培养基为基础培养基，再加入辅料，加热搅拌至完全溶解，调节pH为5.8~6.0，分装于培养瓶内，于121℃灭菌20分钟，得培养基；

（3）外植体接种：在超净工作台上，将外植体伤口处斜面朝下，斜插于培养基上，外植体与培养基的夹角为45~55°，每瓶接种一个外植体，接种后在接种处滴加1滴米糠提取物，得接种培养瓶；

（4）诱导分化培养：将接种培养瓶置于培养室内，1~6天，温度为22~23℃、湿度为86~88%、间歇光照为1600~1800lx、光照8小时、黑暗4小时，7~25天，温度为26~27℃、湿度为91~92%、间歇光照为2100~2300lx、光照9小时、黑暗3小时，得诱导分化苗。

2.根据权利要求1所述促进瓜蒌组培育苗分化的方法，其特征在于，所述步骤（1）的营养液，由以下重量份的原料制成：银耳提取物1.3~1.5、花生衣提取物1.1~1.3、芸苔素内酯0.13~0.15、发酵淘米水900~1000；所述的银耳提取物，含量为30%。

3.根据权利要求2所述促进瓜蒌组培育苗分化的方法，其特征在于，所述的花生衣提取物，是将花生衣洗净，粉碎，加入花生衣重量50~55倍量的体积分数为76~78%的酒精溶液，于56~58℃、32~34kHz超声30~35分钟，过滤，重复超声3次，每次超声减少5分钟，合并所有滤液，烘干至含水量6~8%，得花生衣提取物。

4.根据权利要求2所述促进瓜蒌组培育苗分化的方法，其特征在于，所述的发酵淘米水，将第1~2次淘米时的水混合，向淘米水中加入混合菌，混合均匀，发酵4~5天，得发酵淘米水。

5.根据权利要求4所述促进瓜蒌组培育苗分化的方法，其特征在于，所述的混合菌，由以下重量份的原料组成：啤酒酵母22~24、醋酸菌16~18、嗜热链球菌16~18、德氏乳杆菌11~13。

6.根据权利要求1所述促进瓜蒌组培育苗分化的方法，其特征在于，所述步骤（2）的辅料，由以下质量浓度的原料组成：白砂糖21~23g/L、琼脂6.2~6.4g/L、复硝酚钠0.5~0.7g/L、氨茶碱0.24~0.26mg/L、缩节胺0.13~0.15mg/L。

7.根据权利要求1所述促进瓜蒌组培育苗分化的方法，其特征在于，所述步骤（3）的米糠提取物，将米糠粉碎至80~100目，加入米糠重量8~10倍量的水，混合均匀，加入淀粉酶和纤维素酶的混合酶，使混合酶的质量分数为0.03~0.05%，于38~40℃搅拌酶解180~200分钟，于126~128℃蒸煮30~35分钟，过滤后再加入米糠重量8~10倍量的水，反复蒸煮4次，合并所有滤液，加热浓缩至体积为原来的1/5，得米糠提取物。

8.根据权利要求7所述促进瓜蒌组培育苗分化的方法，其特征在于，所述的混合酶，淀粉酶和纤维素酶的重量比为4~5:1~2。