[发明专利]一种棉叶中萜烯类物质的测定方法

权利要求书

1.一种棉叶中萜烯类物质的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括；

步骤一 仪器试剂准备

准备液相色谱仪，DAD检测器，色谱柱，超声清洗器，振荡器，离心机；

准备棉酚标准品；

步骤二 植株材料准备

采集棉叶样品；

步骤三 棉酚标准品溶液的制备

称取棉酚标准品，用丙酮溶解，定容至容量瓶中，得到棉酚标准储备液，避光保存；

步骤四 棉叶测试样品溶液的制备

称取粉碎样品于离心管中，加入提取溶剂，提取溶剂为体积比80∶20∶0.1的乙腈、水、磷酸，超声提取，提取液离心分离，经微孔滤膜过滤，获得棉叶测试样品溶液；

步骤五 确定棉酚的峰

在相同的色谱条件下，将步骤四获得的棉叶测试样品溶液的HPLC图谱与棉酚标准品的HPLC图谱对比，确定棉酚的峰。

2.如权利要求1所述的棉叶中萜烯类物质的测定方法，其特征在于，所述步骤一中液相色谱仪为安捷伦1100型高效液相色谱仪，所述色谱柱为Eclipse Plus C₁₈柱，5μm，4.6×250mm，测试方法中所用有机试剂甲醇、丙酮、乙腈、磷酸均为色谱纯试剂，采用超纯水。

3.如权利要求1所述的棉叶中萜烯类物质的测定方法，其特征在于，所述步骤二中棉叶样品采集后，液氮研磨后真空干燥脱水处理。

4.如权利要求1所述的棉叶中萜烯类物质的测定方法，其特征在于，所述步骤三具体为，称取棉酚标准品50mg，用丙酮溶解，定容至50mL棕色容量瓶中，得到浓度为1000mg/L的棉酚标准储备液，4℃冰箱避光保存。

5.如权利要求1所述的棉叶中萜烯类物质的测定方法，其特征在于，所述步骤四具体为，称取粉碎样品100mg于离心管中，精确至0.0001g，加入2mL提取溶剂，提取溶剂为体积比80∶20∶0.1的乙腈、水、磷酸，超声提取15min，提取液离心分离，经0.45μm微孔滤膜过滤，获得棉叶测试样品溶液。

6.如权利要求1所述的棉叶中萜烯类物质的测定方法，其特征在于，所述步骤五中色谱条件为，HPLC法，流动相为甲醇∶1％磷酸，V/V＝85∶15，等度洗脱；流速：1.0mL/min；检测波长：235nm；柱温：25℃；进样量20μL。