[发明专利]一种用于提取植物RNA的试剂盒以及提取方法

说明书

本发明公开了一种用于提取植物RNA的试剂盒以及提取方法。本发明用于提取植物RNA的试剂盒包括：溶液A：1～2％SDS、10～100mM EDTA(pH 8.0)、0.1～1M Tris‑HCl(pH 7.0～8.0)、0.5～2M NaCl和1～10％β‑巯基乙醇；溶液B：3～7M KAC；溶液C：水饱和酚(pH 4.5)；溶液D：体积比为24：1的氯仿和异戊醇；溶液E：异丙醇。本发明用于提取植物RNA的试剂盒可以高效提取得到纯度高且完整性好的植物RNA，是分子生物学的多项实验研究的关键前提，具有良好的应用前景和实用价值。本发明还公开了一种使用上述试剂盒提取RNA的方法。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，更具体地说，本发明涉及一种可以从植物中分离到纯度高且完整性好的RNA的试剂盒以及相应的提取方法。

背景技术

在进行植物基因克隆、Northern杂交分析、cDNA文库构建、RT-PCR和Realtime PCR等分子生物学的研究中，需要得到完整的RNA；近年兴起的高通量测序，对RNA的质量和浓度要求更高，高通量测序的RNA浓度要求大于200ng/uL，总量大于15ug。从植物中分离到纯度高且完整性好的RNA，是顺利进行上述的实验关键。

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是兰科石斛属多年附生草本植物。由于其水溶性多糖含量较高，从中提取RNA非常困难。这是因为植物组织中水溶性多糖的理化性质与RNA相似，溶于水而不溶于有机溶剂(无水乙醇、异丙醇)，很难将它们分开。另外多糖可以还能抑制许多酶的活性，污染了水溶性多糖的RNA样品无法用于进一步的分子生物学研究。另外，由于富含多酚类的植物，在植物组织受到破坏后，就会释放出大量的酚，酚被氧化而形成褐色醌类物质能与RNA稳定结合，很难分离；淀粉也是一类降低RNA质量和产量的物质。所以很难从富含水溶性多糖、多酚和淀粉的植物材料中分离提取到高纯度、高浓度完整的RNA。

目前针对富含水溶性多糖、多酚和淀粉的植物的RNA提取方法和RNA提取试剂盒的效果均不理想，有人通过CTAB法针对富含水溶性多糖多酚的植物进行RNA提取，但存在RNA降解的问题，提取效率低；还有人使用改良版SDS法对植物进行RNA提取，经实验，提取过程中溶液会粘稠成团，无法摇匀，无法进行下一步实验；还有人使用天泽RNA Out2.0进行RNA提取，在水溶性多糖含量低于20％时可以提取到RNA，但效率较低，只能满足一些常规实验，无法满足高通量测序的需求；当水溶性多糖含量更高时，水溶性多糖会与RNA缠绕在一起堵住滤膜，无法洗脱。还有使用低浓度乙醇处理、氯化锂沉淀法等来去除水溶性多糖，但均会使RNA提取效率大大降低。

有鉴于此，确有必要提供一种可以从植物中分离到纯度高且完整性好的RNA的试剂盒以及相应的提取方法。

发明内容

本发明的目的在于：克服现有植物RNA提取中，当植物水溶性多糖、多酚、蛋白质含量较高时出现的影响RNA提取效率等问题，提供一种可以从植物中分离到纯度高且完整性好的RNA的试剂盒以及相应的提取方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供了一种用于提取植物RNA的试剂盒，包括：

溶液A：1～2％SDS、10～100mM EDTA(pH 8.0)、0.1～1M Tris-HCl(pH 7.0～8.0)、0.5～2M NaCl和1～10％β-巯基乙醇；

溶液B：3～7M KAC；

溶液C：水饱和酚；

溶液D：体积比为24：1的氯仿和异戊醇；

溶液E：异丙醇。

作为本发明用于提取植物RNA的试剂盒的一种改进，所述试剂盒还包括溶液F，其中，所述溶液F为含有75％乙醇，用于对RNA沉淀进行洗涤。