[发明专利]一种旱柳枝条皮层叶绿体的制备方法

权利要求书

1.一种旱柳枝条皮层叶绿体的制备方法，包括1)树皮采集，2)机械匀浆，3)纱布过滤，4)叶绿体粗沉淀制备，5)叶绿体粗沉淀悬浮，6)连续密度梯度液制备，7)等密度离心，8)完整叶绿体回收；其特征在于应用预形成梯度等密度离心法获得旱柳枝条皮层叶绿体。

2.根据权利要求1所述旱柳枝条皮层叶绿体的制备方法，其特征在于所述1)树皮采集，是指在生长季清晨从旱柳当年生枝条上取木质部外侧的树皮，4℃避光保存。

3.根据权利要求1所述旱柳枝条皮层叶绿体的制备方法，其特征在于所述2)机械匀浆，是指按照1:10的重量体积比加入匀浆液，慢、快各匀浆2次，每次5秒、间隔1分钟。

4.根据权利要求1所述旱柳枝条皮层叶绿体的制备方法，其特征在于所述4)叶绿体粗沉淀制备，是指将收集的滤液先在200g下离心，使细胞壁和细胞核沉淀，再取上清液于1500g下离心10min，获得叶绿体粗沉淀。

5.根据权利要求1所述旱柳枝条皮层叶绿体的制备方法，其特征在于所述6)连续密度梯度液制备，是指将20mL等渗40％Percoll装入50mL离心管，置于角转子中40 000g离心1小时，离心机减速设定为No brake。

6.根据权利要求1所述旱柳枝条皮层叶绿体的制备方法，其特征在于所述7)等密度离心，是指将叶绿体粗沉淀悬浮液在连续密度梯度液上方铺层，置于甩开转子中16 000g离心30min，离心机加速设定为5，减速为No brake，离心后得到2层致密绿色条带，上层为破碎叶绿体，下层为完整叶绿体。

7.根据权利要求1所述旱柳枝条皮层叶绿体的制备方法，其特征在于所述8)完整叶绿体回收，是指抽取下层绿色条带，用3倍体积的悬浮液稀释，在1500g下离心2min，获得完整叶绿体沉淀，如用于氧电极测试要立即使用，如用于后续的组学分析可在液氮中保存。