[发明专利]一种提高小鼠克隆胚胎发育率的体外培养方法

权利要求书

1.一种提高小鼠克隆胚胎发育率的体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，将重组好的胚胎细胞经激活液激活2-3h后，置于初级培养液中培养至胚胎细胞发育到二细胞期；

每升所述激活液中含有265-270mg的CaCl₂、0.1mg的FeNO₃、400mg的KCl、95-100mg的MgSO₄·7H₂O、5-6g的NaCl、100mg的NaH₂PO₄、1.5g葡萄糖，余量为四蒸水；

所述初级培养液制备方法是向DMEM培养液中添加乳酸，其中乳酸与DMEM培养液的质量比例为1～2:1000；

步骤2，将发育到二细胞期的胚胎交替置于第一后期培养液和第二后期培养液中培养，直至克隆胚胎发育至囊胚；

所述第一后期培养液为KSOM培养液，第二后期培养液是不含谷氨酰胺、乙二胺四乙酸二钠和牛血清蛋白的M16培养液。

2.根据权利要求1所述的提高小鼠克隆胚胎发育率的体外培养方法，其特征在于，每升所述激活液中含有265mg的CaCl₂、0.1mg的FeNO₃、400mg的KCl、98mg的MgSO₄·7H₂O、5g的NaCl、100mg的NaH₂PO₄、1.5g葡萄糖，余量为四蒸水。

3.根据权利要1所述的提高小鼠克隆胚胎发育率的体外培养方法，其特征在于，所述初级培养液制备方法是向DMEM培养液中添加乳酸，其中乳酸与DMEM培养液的质量比例为2:1000。

4.根据权利要1所述的提高小鼠克隆胚胎发育率的体外培养方法，其特征在于，将发育到二细胞期的胚胎交替置于第一后期培养液和第二后期培养液中培养时，每次第一后期培养液的培养时间为24-26h，每次第二后期培养液的培养时间为2-3h。