[发明专利]一种CMV‑CTL细胞的体外培养试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外培养试剂盒，具体的说是一种CMV-CTL(human cytomegalovirus-CTL)细胞的体外培养试剂盒。

背景技术

人巨细胞病毒(human Cytomegalovirus，HCMV，简称CMV)亦称细胞包涵体病毒，属疱疹病毒科，在人群中具有较高的感染率，在发达国家成人中感染率为40％～60％，发展中国家可高达100％，我国成人感染率达95％以上，通常呈隐性感染，并在免疫力低下(如器官移植后，AIDS等)时再活化而导致严重感染。目前每年异基因造血干细胞移植病例至少5.5万～6万，而且移植数量每年都在增加，CMV感染是造血干细胞移植的严重并发症之一，不仅会导致移植失败，CMV相关间质性肺炎的死亡率高达50％以上。CMV感染还与动脉粥样硬化、冠心病、肝炎、病毒性眼病、肾小球肾炎、特发性血小板减少性紫癜等具有相关性。另外先天性感染导致流产、死胎、早产比较常见，也是导致先天性耳聋和神经发育障碍最常见的感染性疾病，其临床症状个体差异很大，约5％～10％的患儿在出生时即出现症状，死亡率高达30％。目前无有效、安全的抗CMV药物，故对CMV感染的治疗，仍限于症状性感染时的对症处理。国外研制CMV病毒活疫苗，能诱导产生抗体，但排除疫苗的致癌潜能的问题还有待解决。同时抗原特异性的CTL细胞的安全性已被大量临床试验证实，因此CMV的特异性CTL细胞培养技术是一种安全有效的治疗手段，为CMV感染的预防和治疗提供了更为广阔的前景。

以肿瘤的免疫治疗为主的肿瘤生物治疗是目前临床治疗恶性肿瘤继手术、放疗、化疗之后的第4种模式，它既可以独立地治疗肿瘤，又可与手术及放、化疗结合，具有疗效高、特异性强、副作用小等优点，尤其对于中晚期已经发生转移的恶性肿瘤而言，它具有独到的治疗作用，近年来越来越受到人们的关注。但临床资料表明多种肿瘤细胞可以有效逃避机体的免疫作用，因此肿瘤特异性抗原的免疫治疗是抗病毒及抗肿瘤的研究热点。

基于肿瘤特异性抗原的免疫治疗可以启动以肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应为主的抗肿瘤效应，有效打击肿瘤，防止转移复发且不伤及无关组织。因其抗肿瘤特异性和免疫记忆性是其它方法所不能比拟的，故在肿瘤综合治疗中显示出很好的应用前景。随着对免疫应答机制的深入研究，人们已经意识到启动免疫应答程序的并不是整个抗原分子，而是与MHC分子结合的氨基酸短肽，即CTL表位，因此寻找特异性肿瘤抗原及其相应的CTL表位成为肿瘤免疫治疗的关键。

细胞毒T淋巴细胞(CTL)是目前研究较多的免疫活性细胞，用表达于肿瘤细胞表面的肿瘤抗原的CTL表位肽刺激机体，可以产生抗原特异性的CTL细胞，从而参与肿瘤免疫应答，其机理在于用CTL表位肽刺激机体后，可引起抗原特异性的CTL细胞的克隆增殖，而CD8+的CTL是目前认为抗肿瘤免疫的主要效应细胞，其向胞外释放穿孔素、细胞溶解素等物质或通过细胞表面的死亡受体(肿瘤坏死因子受体家族的成员，包括FAS)等溶解(即杀灭)靶细胞，同时亦可分泌IFN-γ等细胞因子间接杀伤肿瘤细胞，为杀伤肿瘤创造一个良好的微环境。体内的初始T淋巴细胞，经过肿瘤抗原刺激后可分化为效应性T细胞即CTL细胞，杀伤肿瘤，其中一部分效应T淋巴细胞可分化为效应型记忆T淋巴细胞，这种记忆性T淋巴细胞对肿瘤相关性抗原再次刺激后可表现出强烈有效的免疫应答，从而发挥杀伤功效，这也是临床应用CTL抗原肽杀伤肿瘤的一个理论基础。因此应用基于肿瘤抗原的CTL表位肽直接诱导特异性CTL抗肿瘤应答，已经成为一种方便有效的方法。

综上所述，用基于肿瘤抗原的CTL表位肽直接诱导抗原特异性CTL的方法，是十分有效的。急需寻找CMV相应的CTL表位肽，建立高效的CMV-CTL细胞体外培养方法，同时也更有必要设计与之相符的规范的试剂盒来保证培养方法的及时、准确、顺利进行。

发明内容

本发明的目的是提供一种将人的外周血样品中的单个核细胞诱导为CMV-CTL细胞的体外培养试剂盒，该试剂盒可以用于CMV-CTL细胞体外定向分选、诱导、分化、培养、扩增。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种CMV-CTL细胞的体外培养试剂盒，体外培养试剂盒包括以下组分：

诱导CTL细胞分化的CMV抗原肽包被瓶；

诱导T细胞分化的包被瓶；

刺激CTL、T细胞分裂增殖的细胞因子；

和，使T细胞携带相关抗原刺激CMV-CTL增殖、成熟的细胞因子。