[发明专利]一种CMV‑CTL细胞的体外培养试剂盒

权利要求书

1.一种CMV-CTL细胞的体外培养试剂盒，其特征在于：体外培养试剂盒包括以下组分：

诱导CTL细胞分化的CMV抗原肽包被瓶；

诱导T细胞分化的包被瓶；

刺激CTL、T细胞分裂增殖的细胞因子；

和，使T细胞携带相关抗原刺激CMV-CTL增殖、成熟的细胞因子。

2.按权利要求1所述的CMV-CTL细胞的体外培养试剂盒，其特征在于：所述体外培养试剂盒包括无血清培养基、细胞分选液和细胞分散剂；其中，细胞分散剂为10％的人血清白蛋白。

3.按权利要求1所述的CMV-CTL细胞的体外培养试剂盒，其特征在于：

所述诱导CTL细胞分化的包被瓶(CTL5)为经CMV抗原肽、CD137单克隆抗体、γ干扰素、白细胞介素15包被的包被瓶；

所述诱导T细胞分化的包被瓶(CTL6)为经抗CD3单克隆抗体、植物凝集素、白细胞介素21包被的包被瓶。

4.按权利要求1或3所述的CMV-CTL细胞的体外培养试剂盒，其特征在于：

所述所述诱导CTL细胞分化的包被瓶为将CMV抗原肽、CD137单克隆抗体、γ干扰素、白细胞介素15充分溶解于磷酸盐缓冲液内获得包被溶液，将所得包被溶液浸润整个培养瓶的底面，浸润后于4℃静置12-24小时，而后将经包被的CMV抗原肽培养瓶于冻干机器中处理，待用；其中，包被溶液中CMV抗原肽浓度为180-200ng/mL、CD137单克隆抗体浓度为140-150ng/mL、γ干扰素浓度为0.4-0.45万单位/mL、白细胞介素15浓度为80-90ng/mL；

所述诱导T细胞分化的包被瓶为将抗CD3单克隆抗体、植物凝集素、白细胞介素21充分溶解于磷酸盐缓冲液内获得包被溶液，将所得包被溶液浸润整个培养瓶的底面，浸润后于4℃静置12-24小时，而后将经包被的培养瓶于冻干机器中处理，待用；其中，包被溶液中抗CD3单克隆抗体浓度为250-270ng/mL、植物凝集素浓度为60-65μg/mL、白细胞介素21浓度为140-150ng/mL。

5.按权利要求1所述的CMV-CTL细胞的体外培养试剂盒，其特征在于：所述刺激CTL、T细胞分裂增殖的细胞因子为细胞因子9、细胞因子10和细胞因子12，其中，细胞因子9的成分为50万单位的IL-2，细胞因子10的成分为100万单位的IL-2，细胞因子12的成分为400万单位的IL-2；

使T细胞携带相关抗原刺激CMV-CTL增殖、成熟的细胞因子为细胞因子11，其中，细胞因子11的成分为200ng的CMV抗原肽。

6.一种利用权利要求1所述的CMV-CTL细胞的体外培养试剂盒进行体外培养的方法，其特征在于：将待培养细胞于所述试剂盒内细胞分选液内对T淋巴细胞进行定向分选：而后对CTL细胞及T淋巴细胞进行诱导、分化、培养；培养后经试剂盒内细胞因子而后对CTL细胞及T淋巴细胞进行扩增，扩增后再对特异性CMV-CTL细胞进行扩增，进而实现CMV-CTL细胞的体外培养。