[发明专利]体外诱导人的多能干细胞分化为精原干细胞的方法

权利要求书

1.一种体外诱导人的多能干细胞分化为精原干细胞的方法，其特征在于，包括：

步骤1：首先将人的多能干细胞培养在饲养层细胞上或在TeSR培养基中培养1-2天，然后在第一分化培养基中继续培养8-15天，其中，前面4-6天在37℃，5％CO₂浓度下，饱和湿度培养箱中培养，然后移到34℃，5％CO₂浓度下，饱和湿度培养箱中培养2-11天；

步骤2：将步骤1所得的细胞转到第二培养基中，34℃，5％CO₂浓度下，饱和湿度培养箱中培养4-8天；

步骤3：将步骤2中的第二分化培养基换成第三分化培养基，细胞继续在34℃，5％CO₂浓度下，饱和湿度培养箱中培养4-8天。

2.如权利要求1所述的体外诱导人的多能干细胞分化为精原干细胞的方法，其特征在于，所述的第一分化培养基包括基础培养基a-MEM，0.88μM硬脂酸，60μM腐胺，2.36μM棕榈酸，0.21μM棕榈油酸，2.71μm亚油酸，1.02μM油酸和0.43μM亚油酸。

3.如权利要求2所述的体外诱导人的多能干细胞分化为精原干细胞的方法，其特征在于，所述的第一分化培养基还包括10μg/ml转铁蛋白，10mMHepes，2mM L-谷氨酰胺，50mMβ-巯基乙醇，0.2％牛血清白蛋白，5μg/ml胰岛素。

4.如权利要求2所述的体外诱导人的多能干细胞分化为精原干细胞的方法，其特征在于，所述的第一分化培养基还包括20ng/ml重组人的胶质细胞源性神经营养因子和1ng/ml重组人的碱性成纤维生长因子。

5.如权利要求1所述的体外诱导人的多能干细胞分化为精原干细胞的方法，其特征在于，所述的第二分化培养基包括advanced DMEM-F12基础培养基，2％胎牛血清，5ng/ml GDNF，2μM全反式维甲酸，和50ng/ml干细胞因子。

6.如权利要求1所述的体外诱导人的多能干细胞分化为精原干细胞的方法，其特征在于，所述的第三分化培养基包括advanced DMEM-F12基础培养基，4ng/ml GDNF，0.1μg/ml睾酮，8μg/ml维生素C，3U/ml维生素A，0.2μg/ml维生素E和0.1U/ml重组人的卵泡刺激素。