[发明专利]一种提高异养微藻蛋白质含量的过补偿培养方法

权利要求书

1.一种提高异养小球藻蛋白质含量的过补偿培养方法，其特征在于，采用过补偿吸收效应，在小球藻培养过程中先采用氮缺乏培养基造成氮饥饿，然后快速切换氮充足培养基，高氮源浓度刺激细胞氮代谢，激发蛋白质合成，以得到高蛋白质含量的异养小球藻，其具体培养步骤为：A、培养基的配制：第一阶段采用氮缺乏修改BG11⁺培养基，为低氮浓度培养基，其氮元素浓度为2-6 mmol L^-1，第二阶段采用氮充足修改BG11⁺培养基，其氮元素浓度为10-30 mmol L^-1；B、接种：二级种子液培养2-6天后，在无菌条件下接种至氮缺乏的修改BG11⁺发酵培养基中；C、改变氮浓度：培养到对数生长初期，第2-4天，采用“无菌离心”手段，将藻体转移至新鲜氮充足修改BG11⁺培养基中；D、继续培养：在氮充足培养基中继续发酵培养至对数期末期，第4-8天。

2.根据权利1所述，所用小球藻为普通小球藻，但是不仅限于该一种小球藻，所有能利用此方法增加蛋白质含量的微藻都应该包含在内。

3.所用培养基为小球藻通用培养基及其改进培养基，包括但不仅限于BG11养基和SE培养基等。

4.权利1所述，C步骤中，“无菌离心分阶段培养法”具体步骤：将发酵液转移至已灭菌的离心管中，离心，弃去上清液，向离心管中加入氮充足修改BG11⁺培养基，混匀后倾倒至生物反应器中继续培养，以上整个过程均在无菌条件下操作。

5.权利1和权利4所述，氮元素包括有机氮源和无机氮源。

6.权利1所述，氮缺乏修改BG11⁺培养基配方为：

（1）氮源，2-6 mmol L^-1

（2）有机碳源，5-30 g L^-1

（3）K₂HPO₄, 3.0-5.0 g溶于100 mL dH₂O

（4）MgSO₄·7H₂O, 6.5-8.5 g溶于100 mL dH₂O

（5）CaCl₂·2H₂O, 2.6-4.6 g溶于100 mL dH₂O

（6）柠檬酸, 0.4-0.8 g溶于100 mL dH₂O

（7）柠檬酸铁铵, 0.4-0.8 g溶于100 mL dH₂O

（8）EDTA-Na₂, 0.05-0.15 g溶于100 mL dH₂O

（9）Na₂CO₃, 1.0-3.0 g溶于100 mL dH₂O

（10）A₅溶液：H₃BO₃, 2.86 g L^-1; MnCl₂·4H₂O, 1.86 g L^-1; ZnSO₄·7H₂O, 0.22 g L^-1; Na₂MoO₄·2H₂O, 0.021 g L^-1; CuSO₄·5H₂O, 0.08 g L^-1; Co(NO₃)₂·6H₂O, 0.0 5 g L^-1溶于水中，

用1 M NaOH或HCl调pH至7.1；

说明：配制母液（3）-（10）号时，药品分别配制，分别存放，（10）号中的药品按量配制后混合存放；配制工作液时，取（3）-（10）号母液各1 mL，另取（1）氮源2-6 mmol L^-1及（2）有机碳源5-30 g L^-1，加入蒸馏水中并定容至1000 mL，然后用1 M NaOH或HCl调节pH至7.1，并115℃湿热灭菌20 分钟。