[发明专利]一种抗DDX5的全人源单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种全人源的抗DDX5的单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明还公开了编码所述抗体的完整基因及氨基酸序列。本发明从全人源抗体杂交瘤细胞库中筛选出抗DDX5的单克隆抗体，通过大规模培养收集细胞培养上清，经过亲和柱纯化获得。然后通过对抗体基因测序获得该抗体cDNA序列，并克隆到真核表达载体中，通过宿主细胞表达系统大规模培养，经过亲和柱纯化获得该抗体。本发明得到的抗DDX5全人源抗体对DDX5具有良好的亲和力，并能够抑制DDX5在细胞核内的功能，因此可用于DDX5相关的肿瘤、感染性疾病、免疫系统疾病的诊断和治疗。

技术领域

本发明涉及一种全人源单克隆抗体及其制备方法和应用，特别涉及一种抗DDX5的全人源单克隆抗体及其制备方法和在检测DDX5表达以及预防或治疗DDX5相关的疾病中的用途，本发明属于医药技术领域。

背景技术

DDX5(DEAD-Box Helicase 5)隶属于DEAD box家族，又称为p68，是一种ATP依赖的RNA解旋酶，最初被认为是一种参与细胞生长和分化的核蛋白。RNA解旋酶(RNA helicases)是一个包含了与RNA代谢(翻译起始、核糖体形成、前mRNA拼接和mRNA降解)许多方面有关的蛋白质家族。RNA解旋酶是由水解ATP供给能量来解开RNA的酶。它们常常依赖于单链的存在，并能识别复制单链结构。一般在RNA复制过程中起到催化双链RNA解旋的作用。DDX5同时具有依赖于RNA的ATPase活性，它与SV40大T抗原有交叉免疫反应。

DDX5在RNA代谢的各个方面发挥重要作用，参与mRNA前体加工、RNA反转、RNA转运、核糖体的合成和翻译以及RNA降解等过程。同时DDX5转录后的磷酸化也参与了肿瘤的发生和细胞的增殖和转化。例如，蛋白的SUMO(sumoylation)修饰可以直接影响DDX5的蛋白稳定性及转录功能。DDX5与HDAC1结合能够抑制转录，这种转录抑制的过程能够被SUMO修饰所调节。DDX5还能与Runx2,p53,Smad3,CBP以及p300相互作用。

已有研究表明，DDX5在乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、急性髓性白血病等多种肿瘤细胞中高表达，抑制DDX5的表达能够抑制这些种类肿瘤细胞的增殖。DDX5在调控丙型肝炎病毒复制过程中亦发挥一定作用，说明DDX5的监测和调控在实现肿瘤和感染性疾病的精准诊断和治疗中具有重要价值。

目前全人源单克隆抗体是治疗性抗体发展的主要方向，本发明通过人源杂交瘤技术获得了全人源抗体克隆库，为抗体的制备筛选提供了良好的技术平台，筛选出来的抗体为人体内自然产生的抗体，避免了人源化过程引入的人为加工因素，更符合人体内的自然生理过程，具有广泛的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗DDX5的全人源单克隆抗体及其制备方法和应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

(1)抗DDX5单克隆抗体的初步筛选，通过ELISA技术对全人源杂交瘤抗体库中的抗体进行筛选，获得了一种亲和力较高的抗体。

(2)扩大培养筛选到的人源杂交瘤细胞株，亲和层析纯化单克隆抗体，通过免疫印迹技术，检测筛选到的抗体与DDX5纯化蛋白之间的亲和力；

(3)对筛选到的杂交瘤细胞进行抗体全基因测序，构建抗体DNA重组表达质粒。

(4)抗体DNA重组表达质粒转染宿主细胞，表达并纯化单克隆抗体，进行亲和力鉴定和比较。

(5)将上述(2)、(4)中获得的单克隆抗体与肿瘤细胞作用进行生物学功能鉴定和比较。

在上述研究的基础上，本发明筛选得到一株能够特异性结合DDX5的全人源单克隆抗体，其由轻链和重链组成，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.6所示，所述重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.8所示。