[发明专利]二肽肽酶I体外微量快速检测方法

权利要求书

1.一种涉及到血液二肽肽酶I活性表达的体外快速检测方法，特征在于用于纸层析法进行检测，步骤如下：

A.准备工作：

底物XYZ1601的制备：以7-氨基-4-三氟甲基香豆素与BOC-苯丙氨酸通过生成酰胺的方法获得BOC-苯丙氨酸-三氟甲基香豆，在三氟乙酸的条件下脱去BOC保护，再与BOC-甘氨酸反应，生成BOC-甘氨酸-苯丙氨酸-三氟甲基香豆素，最后脱去BOC得到XYZ1601的方法；

缓冲液的准备：XYZ1601--DPPI专属底物0.5mM溶于缓冲液(25mM柠檬酸,10mM氯化钠，pH 6.0)；

样液的准备：rhDPPI溶液、人鲜血和CIA大鼠眼眶取新鲜血液1μL，加入1.65μL的XYZ1601，37℃孵育10-20分钟；

展开剂准备：石油醚和二氯甲烷，比例为2:1配制成展开液；

B.点样和层析：在纸层析用滤纸条的一端点加样品溶液，样品间距2.0cm，将点样后的滤纸在展开剂中展开；

C.观察：展开剂前段接近纸层析条前沿时取出，风干后置于紫外灯下观察，紫外灯波长为365nm；

D.DPPI活性的确认：测量原点至层析斑点距离，原点至溶剂前沿距离，计算R_f值，确认DPPI水解XYZ1601后释放的三氟甲基香豆素的位置，紫外灯下观察层析纸上黄绿色的亮斑大小和强弱，确定血液中DPPI的活性的大小。

2.如权利要求1所述血液中二肽肽酶I的活性表达的检测，其特征在于R_f值根据样品的特性而有变化，在人血R_f＝0.62-0.66，大鼠血R_f＝0.50的条件下，层析纸上黄绿色斑块的大小和强弱(紫外灯下)和血液样品中DPPI活性表达的大小呈正相关，本发明可以适用于人血，大鼠模型、人源及大鼠源的颗粒细胞模型。